Пролиферативный индекс ki 67. Что означают показатели Ki67 при раке молочной железы? Обследование при наличии опухоли

Для цитирования: Лазукин А.В. Роль маркера Ki-67 в определении прогноза при раке молочной железы // РМЖ. 2013. №1. С. 28

Реферат. Анализируются возможности маркера клеточной пролиферации Ki-67 для оценки пролиферативной активности опухоли, прогноза течения заболевания и решения вопроса о дополнительном лекарственном лечении новообразования.

Ключевые слова: пролиферативная активность, рак молочной железы, Ki-67, адъювантная и неоадъювантная химиотерапия, прогноз.
Прогностическая роль Ki-67 при назначении адъювантной химиотерапии
Для оценки пролиферативной активности опухоли применяются различные подходы, включая подсчет фигур митозов в поле зрения, использование меченных нуклеотидов и оценку сигнала от препарата, встроившегося в структуру ДНК, а также проточную цитофлуометрию фракции клеток, находящихся в S-фазе . Однако наиболее практически применимым методом является иммуногистохимическое определение Ki-67 - антигена в ядре клеток во всех фазах клеточного цикла, кроме G0 .
Однако, несмотря на большое количество исследований, направленных на установление связи между уровнем Ki-67 и предполагаемой терапевтической тактикой, в настоящее время нет единого мнения по поводу прогностической роли Ki-67 при раннем раке молочной железы (РМЖ) . В метаанализ, проведенный Urruticoechea и соавт., были включены результаты 18 клинических исследований, в которых приняли участие более 200 пациенток. В 17 из 18 исследований была выявлена статистически достоверная корреляция между экспрессией Ki-67 и прогнозом РМЖ, однако в данных исследованиях не было единого референсного уровня Ki-67, таким образом, нет достоверных критериев отличия повышенного и низкого уровня антигена . В описанных исследованиях верхней границей пониженного уровня Ki-67 являлись значения от 1 до 28,6%, что несколько снижает клиническую ценность определения данного маркера .
Исследования American Society of Clinical Oncology (ASCO) Tumor Marker Guidelines Committee показали, что в настоящее время достоверных доказательств прогностической значимости определения Ki-67 в клинической практике недостаточно, чтобы рекомендовать рутинное определение Ki-67 для прогноза у пациентов с впервые диагностированным РМЖ .
Клиническая значимость определения Ki-67 для прогноза адъювантной терапии РМЖ может быть повышена, если выделить определенные группы опухолей, в которых данный маркер может быть применим, либо Ki-67 должен определяться в качестве одного из параметров панели биомаркеров. Например, Cuzick J. и соавт. предлагают использовать иммуногистохимическую панель, основанную на определении четырех маркеров, таких как рецепторы эстрогенов, рецепторы прогестерона, HER2/neu, а также Ki-67 .
По данным других исследовательских групп, определение Ki-67 может являться важным этапом прогностического алгоритма относительно риска рецидива у пациенток, страдающих ранним РМЖ и получающих летрозол или тамоксифен в качестве адъювантной терапии .
Однако в литературе имеются наблюдения и о предиктивной роли Ki-67 при назначении химиотерапевтического лечения. Согласно результатам рандомизированного клинического исследования PACS01, в группе пациенток с эстроген-позитивными опухолями и высоким индексом Ki-67 целесообразно добавление доцетаксела к эпирубицину и 5-фторурацилу в качестве адъювантной химиотерапии . Указанные результаты были подтверждены в исследовании Cancer International Research Group 001 trial . Однако эти результаты не соответствуют данным International Breast Cancer Study Group Trials VIII and IX. В этих исследованиях была показана предиктивная роль высокого уровня экспрессии Ki-67 в группе с рецептор-позитивным РМЖ без признаков заболевания в лимфатических узлах по отношению к проведению адъювантной терапии с включением мето-трексата, циклофосфамида и 5-фторурацила в дополнение к проводимой эндокринной терапии . Таким образом, важно проведение исследований, направленных на выделение групп пациенток с высокими показателями Ki-67, которые смогут получить максимальную пользу от различных режимов адъювантной химиотерапии.
Предиктивная роль Ki-67 при назначении адъювантной химиотерапии при ЭР-негативном РМЖ обсуждалась в меньшем количестве публикаций. Несколько этих исследований были посвящены неоадъювантной терапии РМЖ, а остальные - адъювантной. В результате исследований Ring A.E. и соавт., а также Guarneri V. и соавт. было показано, что РЭ-негативные опухоли более чувствительны к химиотерапии, чем РЭ-позитивные опухоли .
Предикторная роль Ki-67 при назначении
неоадъювантной терапии
Назначение неоадъювантной химиотерапии преследует цели улучшения исходов хирургического лечения, заключающиеся в уменьшении объема оперативного вмешательства и частичной девитализации опухоли. Кроме того, проведение предоперационной химиотерапии позволяет оценить лечебный патоморфоз проводимого лечения, таким образом, определить спектр препаратов для адъювантной терапии. На этом этапе также важен поиск клинических, биохимических и молекулярных прогностических факторов эффективности проводимой химиотерапии .
Предикторная роль Ki-67 при назначении гормональной терапии не столь описана, как в случае химиотерапии, однако некоторые авторы указывают на важность определения Ki-67 . Оценка индекса Ki-67 при назначении гормональной терапии проводилась в рамках двух исследований: IMRACT, в котором сравнивалась эффективность неоадъювантной терапии анастрозолом, тамоксифеном и комбинации анастрозола и тамоксифена , а также исследования P024, в котором сравнивалось назначение летрозола с назначением тамоксифена в неоадъювантном режиме . При сравнении индекса Ki-67 в данных исследованиях была показана корреляция между значениями супрессии индекса Ki-67 в процессе лечения и частотой рецидивирования после неоадъювантной гормонотерапии . В исследовании P024 было продемонстрировано, что индекс Ki-67 наряду с такими показателями, как размер опухоли, статус регионарных лимфатических узлов, экспрессия ЭР, является независимым предиктором общей и безрецидивной выживаемости .
На основании данных показателей сформирован предоперационный прогностический эндокринный индекс (PEPI), который является валидным предиктором долгосрочных исходов в исследовании IMPACT . В исследовании Ellis M.J. и соавт. было показано, что на основании PEPI могут быть выделены группы пациентов с низким риском рецидивирования после проведения гормональной терапии, для них назначение дополнительной химиотерапии не является обязательным этапом лечения. Также на основании данного индекса можно выделить группы пациентов, резистентных к гормональной терапии и нуждающихся в назначении химиотерапии .
Таким образом, к нулевой категории на основании подсчета индекса PEPI относятся опухоли размером после проведенного предоперационного лечения менее 5 см, при условии негативного статуса лимфатических узлов, уровне Ki-67 < 2,7% и РЭ > 2. В данной группе пациенток в адъювантном режиме может быть продолжена эндокринная терапия, в то время как при показателях Ki-67 на уровне 10% пациенткам следует назначать химиотерапию. Вышеуказанные результаты были получены в когортном исследовании Z1031 .
Данные результаты был подтверждены в крупных исследованиях ATAC и Breast International Group 1-98 trial, посвященных изучению тамоксифена, анастрозола и комбинации препаратов в адъювантном режиме .
Сходные результаты были получены в исследовании Z1031, проведенном American College of Surgeons Oncology Group . В нем сравнивалось назначение в нео-адъювантном режиме экземестана и назначение анастрозола. При сравнении эффективности терапии указанными препаратами различий в степени снижения индекса Ki-67 не было выявлено, результаты сопоставимы с итогами исследования NCIC CTG MA.27, в котором были получены сходные показатели выживаемости при терапии описанными препаратами в адъювантном режиме .
На основании результатов указанных исследований был выполнен ряд экспериментов, включающих 2-недельный курс неоадъювантной гормонотерапии. Конечной точкой исследования являлось определение значения индекса Ki-67 .
В исследовании Smith I.E. и соавт. оценивалась эффективность назначения комбинации гефитиниба и анастрозола, индекс Ki-67 рассматривался как первичная конечная точка исследования, которая являлась мерой ответа опухоли на терапию. В данном исследовании был показан положительный эффект гефитиниба как на показатели выживаемости, так и на степень снижения Ki-67 .
Ki-67 как конечная точка при исследовании фармакодинамики препаратов
Отсутствие снижения индекса Ki-67 в процессе лечения может быть предиктором неблагоприятного исхода. В исследовании IMPACT было продемонстировано, что Ki-67 является достоверным предиктором выживаемости при эндокринной терапии. Результаты 2-недельной эндокринной терапии показали, что время до прогрессирования коррелирует с уровнем Ki-67 до начала терапии. Согласно данным Dowsett M. и соавт., значение Ki-67 после вышеуказанной терапии может рассматриваться в качестве индекса резидуального заболевания после проведения эндокринной терапии. Важность определения индекса Ki-67 после 2 нед. нео-адъювантной эндокринной терапии была показана на примере исследования POETIC, в котором приняли участие 4 тыс. пациенток, получавших периоперационную эндокринную терапию .
Уровень Ki-67 и назначение
неоадъювантной химиотерапии
Ценность динамики изменения индекса Ki-67 в ходе неоадъювантной химиотерапии менее выражена, чем в случае эндокринной терапии. Снижение уровня Ki-67 происходит в большинстве случаев проведения нео-адъювантной химиотерапии, однако степень выраженности редукции данного признака коррелирует со степенью ответа . В исследовании Jones R.L. и соавт. было показано, что отсутствие редукции уровня Ki-67 наряду с отсутствием полного патоморфоза являются предикторами неблагоприятного исхода заболевания .
Таким образом, опухолевый маркер Ki-67 является одним из наиболее востребованных в онкологии для морфологического определения степени злокачественности новообразования, одним из дополнительных критериев диагностики злокачественных новообразований и решения вопроса о виде дополнительного консервативного лечения в адъювантном и/или неоадъювантном режимах.

Литература
1. Assersohn L., Salter J., Powles T.J. et al. Studies of the potential utility of Ki67 as a predictive molecular marker of clinical response in primary breast cancer // Breast Cancer Res Treat. 2003. Vol. 82 (2). Р. 113-123.
2. Baum M., Buzdar A., Cuzick J. et al. Anastrozole alone or in combination with tamoxifen versus tamoxifen alone for adjuvant treatment of postmenopausal women with early breast cancer: first results of the ATAC randomised trial Lancet. 2002. Vol. 359 (9324). Р. 2131-2139.
3. Cuzick J., Dowsett M., Wale C. et al. Prognostic value of a combined ER, PgR, Ki67, HER2 immunohistochemical (IHC4) score and the comparison with the GHI recurrence score—results from TransATAC // Cancer Res. 2009. Vol. 69. 503 р.
4. Dowsett M., Nielsen T.O., A"Hern R., Bartlett J., Coombes R.C., Cuzick J., Ellis M., Henry N.L., Hugh J.C., Lively T., McShane L., Paik S., Penault-Llorca F., Prudkin L., Regan M., Salter J., Sotiriou C., Smith I.E., Viale G., Zujewski J.A., Hayes D.F. International Ki-67 in Breast Cancer Working Group. Assessment of Ki67 in breast cancer: recommendations from the International Ki67 in Breast Cancer working group // J Natl Cancer Inst. 2011. Vol. 103 (22). Р. 1656-1664.
5. Dowsett M., Smith I.E., Ebbs S.R. et al. Short-term changes in Ki-67 during neoadjuvant treatment of primary breast cancer with anastrozole or tamoxifen alone or combined correlate with recurrence-free survival // Clin Cancer Res. 2005. Vol. 11 (2). Р. 951-958.
6. Dowsett M., Smith I.E., Ebbs S.R. et al. Prognostic value of Ki67 expression after short-term presurgical endocrine therapy for primary breast cancer // J Natl Cancer Inst. 2008. Vol. 99 (2). Р. 167-170.
7. Dressler L.G, Seamer L., Owens M.A., et al. Evaluation of a modeling system for S-phase estimation in breast cancer by flow cytometry // Cancer Res. 1987. Vol. 47 (20). Р. 5294-5302.
8. Ellis M.J., Coop A., Singh B. et al. Letrozole inhibits tumor proliferation more effectively than tamoxifen independent of HER1/2 expression status // Cancer Res. 2003. Vol. 63 (19). Р. 6523-6531.
9. Ellis M.J., Suman V.J., Hoog J. et al. ACOSOG Z1031, a randomized phase 2 neoadjuvant comparison between letrozole, anastrozole and exemestane for postmenopausal women with ER rich stage 2/3 breast cancer: clinical and biomarker outcomes // J Clin Oncol. 2011. Vol. 29 (17). Р. 2342-2349.
10. Ellis M.J., Tao Y., Luo J. et al. Outcome prediction for estrogen receptor-positive breast cancer based on postneoadjuvant endocrine therapy tumor characteristics // J Natl Cancer Inst. 2008. Vol. 100 (19). Р. 1380-1388.
11. Gerdes J., Lemke H., Baisch H., Wacker H.H., Schwab U. Cell cycle analysis of a cell proliferation-associated human nuclear antigen defined by the monoclonal antibody Ki-67 // J Immunol. 1984. Vol. 133 (4). Р. 1710-1715.
12. Goss P.E., Ingle J.N., Chapman J.-A.W. et al. Final analysis of NCIC CTG MA.27: a randomized phase III trial of exemestane versus anastrozole in postmenopausal women with hormone receptor positive primary breast cancer // Cancer Res. 2010. Vol. 70 (24). 75 р.
13. Guarneri V., Broglio K., Kau S.W. et al. Prognostic value of pathologic complete response after primary chemotherapy in relation to hormone receptor status and other factors // J Clin Oncol. 2006. Vol. 24 (7). Р. 1037-1044.
14. Guix M., Granja N. de M., Meszoely I. et al. Short preoperative treatment with erlotinib inhibits tumor cell proliferation in hormone receptor-positive breast cancers // J Clin Oncol. 2008. Vol. 26 (6). Р. 897-906.
15. Harris L., Fritsche H., Mennel R. et al. American Society of Clinical Oncology 2007 update of recommendations for the use of tumor markers in breast cancer // J Clin Oncol. 2007. Vol. 25 (33). Р. 5287-5312.
16. Hugh J., Hanson J., Cheang M.C. et al. Breast cancer subtypes and response to docetaxel in node-positive breast cancer: use of an immunohistochemical definition in the BCIRG 001 trial. // J Clin Oncol. 2009. Vol. 27 (8). Р. 1168-1176.
17. Jones R.L., Salter J., A’Hern R. et al. The prognostic significance of Ki67 before and after neoadjuvant chemotherapy in breast cancer // Breast Cancer Res Treat. 2009. Vol. 116 (1). Р. 53-68.
18. Penault-Llorca F., Andre F., Sagan C. et al. Ki67 expression and docetaxel efficacy in patients with estrogen receptor-positive breast cancer // J Clin Oncol. 2009. Vol. 27 (17). Р. 2809-2815.
19. Ring A.E., Smith I.E., Ashley S., Fulford L.G., Lakhani S.R. Oestrogen receptor status, pathological complete response and prognosis in patients receiving neoadjuvant chemotherapy for early breast cancer // Br J Cancer. 2004. Vol. 91 (12). Р. 2012-2017.
20. Robertson J.F., Nicholson R.I., Bundred N.J. et al. Comparison of the short-term biological effects of 7alpha-estra-1,3,5, (10)-triene-3,17beta-diol (Faslodex) versus tamoxifen in postmenopausal women with primary breast cancer // Cancer Res. 2001. Vol. 61 (18). Р. 6739-6746.
21. Smith I.E., Walsh G., Skene A. et al. A phase II placebo-controlled trial of neoadjuvant anastrozole alone or with gefitinib in early breast cancer // J Clin Oncol. 2007. Vol. 25 (25). Р. 3816-3822.
22. Thurlimann B., Keshaviah A., Coates A.S. et al. A comparison of letrozole and tamoxifen in postmenopausal women with early breast cancer // N Engl J Med. 2005. Vol. 353 (26). Р. 2747-2757.
23. Tovey S.M., Witton C.J., Bartlett J.M., et al. Outcome and human epidermal growth factor receptor (HER) 1-4 status in invasive breast carcinomas with proliferation indices evaluated by bromodeoxyuridine labelling // Breast Cancer Res. 2004. Vol. 6 (3). Р. 246-251.
24. Tubiana M., Pejovic M.N., Chavaudra N., et al. The long-term prognostic significance of the thymidine labelling index in breast cancer // Int J Cancer. 1984. Vol. 33 (4). Р. 441-445.
25. Urruticoechea A., Smith I.E., Dowsett M. Proliferation marker Ki-67 in early breast cancer // J Clin Oncol. 2005. Vol. 23 (28). Р. 7212-7220.
26. Viale G., Regan M.M., Dell’Orto P. et al. Which patients benefit most from adjuvant aromatase inhibitors? Results using a composite measure of prognostic risk in the BIG 1-98 randomised trial // Ann Oncol. 2011. Vol. 22 (10). Р. 2201-2207.
27. Viale G., Regan M.M., Mastropasqua M.G. et al. Predictive value of tumor Ki-67 expression in two randomized trials of adjuvant chemoendocrine therapy for node-negative breast cancer // J Natl Cancer Inst. 2009. Vol. 100 (3). Р. 207-212.
28. Yerushalmi R., Woods R., Ravdin P.M., et al. Ki67 in breast cancer: prognostic and predictive potential // Lancet Oncol. 2010. Vol. 11 (2). Р. 174-183.

Маркер Ki-67 – один из важнейших показателей ракового процесса при обследовании. Уникальный белок – антиген – показывает деление клеток, которые в состоянии покоя не приводят к образованию вещества. Если при тесте на Ki-67 обнаруживается активность клеток, врачи могут диагностировать степень развития карциномы.

Что такое индекс пролиферации

Индекс выявляется при исследовании Ki-76 на экспрессию – это цифровой показатель активности опухолевых клеток. Если уровень экспрессии Ki-67 опухолевых клеток равен 22, это означает 22% активность. Чем выше показатель, тем активнее происходит размножение атипичных клеток и, следовательно, развитие рака.

При раке молочной железы маркер Ki-67 обнаруживается в тканях, взятых с помощью биопсии или в ходе операции по удалению опухоли. С его помощью оценивается геномная активность. Чаще всего этот протеин применяется для уточнения диагноза карциномы молочной железы. Однако использовать он может и для диагностики злокачественных процессов в других органах.

Показания и противопоказания

Обследование назначается при подозрении на агрессивное развитие новообразования

Обследование на Ки-67 при раке молочных желез назначают в таких случаях:

• имеется подозрение на агрессивное развитие новообразования;
• требуется определить эффективную методику карциномы;
• нужно выявить эффективность лечения, а также риски рецидива после проведенной терапии;
• нужно определить вторичные очаги в лимфатических узлах и органах;
• требуется определить гормональный статус новообразования;
• в организме обнаружены другие онкологические процессы.

У иммуногистохимии отсутствуют абсолютные противопоказания. Проводить процедуру нельзя только при острых состояниях, когда у пациентов увеличивается температура.

Особенности проведения ИГХ-исследования для выявления маркера

Для эксцизионной биопсии используют иглу с большим диаметром

Чтобы выполнить исследование Ki-67 при раке молочной железы у женщин и определить, в норме ли показатели, потребуется образец ткани. Его забирают с помощью специальных инструментов из подозрительного участка груди, используя следующие методы:

• Аспирация иглой. Применяется очень тонкий инструмент, введение которого почти не чувствуется и процедуру выполняют без обезболивания.
• Вакуумная биопсия. Врач применяет местный анестетик, вырезает микроскопический кусочек кожи и вводит зонд. Через разрез специалист получает несколько видов материала.
• Эксцизионная биопсия. Для процедуры используется игла с большим диаметром, ткань берут цилиндрической формы под местным обезболиванием.
• Хирургическая биопсия. При выполнении операции удаляется аномальная зона, часть полученного материала направляется на гистологическое исследование.

Результат анализов пациент получает уже через 10-12 суток.

Метод проведения биопсии не может выбираться пациенткой. Способ определяется исключительно врачом и стоит доверять ему без лишних вопросов.

Польза определения индекса Ki-67

Главная задача маркера Ki-67 – определить точный показатель выживаемости. Он успешно с этим справляется, так как точно определяется количество делящихся раковых клеток в опухоли. При высоком уровне можно говорить о стремительном делении клеток, что будет положительно оценено с точки зрения химиотерапии. Если же эти клетки делятся медленно, терапия не даст существенных результатов.

Методы определения значения маркера

Микроскопическое исследование ткани, которое основано на выявлении антител на патологические вещества

Маркер Ki-67 хорошо выявляет особенности опухолевого процесса. Проводят его на тканях опухоли при обязательном гистологическом исследовании обнаруженных новообразований. Также тест на маркер назначают при агрессивном увеличении опухолей.

Пациентки должны понимать, что положительные показатели Ki-67 указывают на высокий риск рецидива и худшую выживаемость даже на ранних стадиях патологии.

Для оценки результатов взятой биопсии применяют несколько методов исследования:

• окрашивание клеток антигена Ki-67 – световые микроскопы помогают оценить визуально количество активных частиц;
• применение антитела MIB1 для маркировки злокачественных клеток;
• положительно окрашенные клетки опухолей среди общего числа позволяют сопоставить их процент относительно здоровых клеток;
• результаты подсчитывают, учитывая все разделы опухоли.

Исследование маркера Ki-67 – это сложная диагностическая процедура. Иногда на биопсии у пациента берут несколько образцов, что позволяет точно определить уровень активности и количество атипичных опухолевых клеток. Для этого используются разные методы оценки.

Прогноз и сопоставление процентного соотношения

Корреляция между интегральными прогностическими индексами и Ki-67 в первичной опухоли и в метастазе лимфоузла

Результаты анализа пациенту выдаются обычно в определенном процентном соотношении. Оно указывает на содержание белка, с помощью которого можно определить тактику лечения. В норме Ki-67 не должен превышать 15%, тогда пациенту ставится благоприятный диагноз и шанс выживания свыше 90%. Чем выше процент Ki-67, тем хуже обстоят дела:

• если Ki-67 равен 10% и меньше, то в 95% случаев после операции срок выживаемости будет более 10 лет;
• при показателе Ki-67 15% в 95% случаев женщины проживают больше 5 лет, в России этот показатель может быть равен 85% случаев;
• при Ki-67 в 20% устанавливается рак молочной железы с активностью новообразования, если лечение начать сразу же, прогноз будет благоприятным, при отказе высок риск прогрессирования болезни и сокращения жизни до 3-5 лет;
• если Ki-67 равен 30% — это указывает на активное развитие и увеличение карциномы в размерах, однако она хорошо будет поддаваться химиотерапии;
• если Ki-67 равен 90%, врачи могут отказаться от лечения – выживаемость в течение 5 лет равна нулю.

При самом высоком показателе Ki-67 женщины, как правило, редко живут дольше 3 лет.

Рак молочной железы с повышенной гормональной зависимостью – очень распространенное заболевание. Оно складывается из ряда факторов, провоцирующих болезнь: беременность, половое созревание, кормление грудью, а затем и предклиматерический период связаны с сильным колебанием гормонов. Прогестероны и эстрогены колоссальным образом воздействуют на женский организм, способствуя неблагоприятному состоянию.

Спровоцировать изменение в груди могут и другие факторы: лечение гормональными средствами в больших дозировках, отсутствие беременностей в течение жизни или бесплодие. Однако это не значит, что рак у нерожавших женщин случается чаще. Прямой связи с беременностями или их отсутствием не существует.

Что делать при плохом диагнозе

При обнаружении последней стадии рака очень важно получить поддержку от родных и близких

При выдаче результатов на руки специалисты лаборатории не дают никаких рекомендаций и пояснений. Однако женщины выясняют значение анализов в интернете. Затем диагноз подтверждается врачом. Далеко не все случаи считаются пригодными для лечения. Это вызывает огромный стресс и тревогу у женщин.

Важно понимать, что даже при обнаружении последней стадии рака молочной железы жизнь не заканчивается в эту же секунду. Многие люди живут больше 1-2 лет. И это время следует потратить на любимых людей, если остаются силы и вера.

Очень важна поддержка близких в этот период, а также контакты с женщинами в таком же состоянии. Нередко группы поддержки тяжелобольных помогают справиться с высоким уровнем тревоги, проработать страхи и подготовиться к окончанию жизненного пути.

Спорные вопросы теста

При получении плохого результата важно помнить, что высокий уровень экспрессии указывает на то, что опухоль будет хорошо поддаваться химиотерапии. Если сразу же начать лечение и потом пройти повторную диагностику, есть все шансы на существенное улучшение состояния. Результаты тестов на Ки-67 иногда не могут быть интерпретированы точно, если патология связана с положительными лимфатическими узлами.

Определение маркера Ki-67 назначается в спорных случаях, когда есть все причины предполагать наличие рака у пациентки. Также обследование проводят, когда рак установлен, но нужно определить его активность и подобрать лучшую тактику терапии.

ID: 2015-06-1276-A-5298

Оригинальная статья (свободная структура)

Маслякова Г.Н., Понукалин А.Н., Цмокалюк Е.Н.

ГБОУ ВПО Саратовский ГМУ им. В.И. Разумовского Минздрава России

Резюме

Ключевые слова

Рак мочевого пузыря, онкомаркер

Статья

Введение. Рак мочевого пузыря (РМП) является самым частым онкологическим заболеванием мочевыделительной системы. В 2011 году в Российской Федерации диагностировано 13784 случая РМП, при этом прирост этого заболевания за последние 10 лет составил 15,26%. Летальность от РМП на первом году с момента установления диагноза составляет 19,5%. , поэтому диагностика и лечение больных раком мочевого пузыря (РМП) является одной из актуальных проблем урологии.

По клиническому течению выделяют мышечнонеинвазивный (Tis, Ta, T1), мышечноинвазивный (T2-T4) и метастатический РМП. Поверхностные и мышечноинвазивные опухоли мочевого пузыря в 90-95% представлены уротелиальной карциномой, но отличаются по целому ряду молекулярно-генетических, морфологических и иммуно-гистохимических признаков.

Мышечноинвазивный рак мочевого пузыря (МИРМП) - потенциально смертельное заболевание, так как без лечения больные погибают в течение 24 месяцев. У 50% больных МИРМП, оперированных радикально, развивается рецидив, что связано с морфологической стадией развития первичной опухоли и состоянием регионарных лимфатических узлов. Наиболее распространенная локализация метастазов уротелиального рака - регионарные лимфатические узлы (78%), печень (38%), легкие(36%), кости (27%), надпочечники (21%) и кишечник (13%), реже (1%- 8%) развиваются метастазы в сердце, головном мозге, почках, селезенке, поджелудочной железе, мозговых оболочках, матке, яичниках, простате и яичках. Следует отметить, что в течение первого года развития заболевания группу МИРМП пополнят еще 15-30% больных с поверхностным РМП, у которых возникает рецидив опухоли с мышечной инвазией .

В России в 2011 году среди зарегистрированных впервые выявленных больных в 45,8% случаев диагностируются I - II, в 37,6% -III и в 16,6% -IV стадии РМП. В большинстве случаев органосохраняющее лечение удается провести только в Т1-Т2 стадиях заболевания. В Т3-Т4 стадиях выполняется цистэктомия или паллиативное лечение. Правильно выбранная тактика лечения является принципиальным моментом для дальнейшей жизни больного. Так, после удаления мочевого пузыря качество жизни больных значительно снижается, и им устанавливается 1 - 2 группы инвалидности. В то же время неоправданно длительное консервативное лечение может привести к гибели больных .

Сегодня изучено влияние на течение РМП более 30 прогностических факторов и установлено, что независимыми факторами, влияющими на общую выживаемость, являются только стадия опухоли и поражение метастазами регионарных лимфатических узлов (EAU-2009).

Результаты лечения РМП непосредственно связаны со стадией заболевания. Так, пятилетняя выживаемость в Т1 стадии составляет 90-80%, в Т2 - 70-63%, в Т3 - 53-32% и в Т4 - 28-5% . Вместе с тем частота ошибок в предоперационном периоде при определении стадии рака мочевого пузыря достигает 73% . Даже морфологическое исследование может давать ошибку в определении глубины инвазии опухоли в 20-50% .

Дооперационная диагностика метастазов в регионарных лимфатических узлах является неудовлетворительной. Компьютерная томография позволяет выявить только 35-40% метастатически пораженных лимфатических узлов, а тонкоигольная аспирационная биопсия лишь незначительно улучшает диагностику, так как ее чувствительность не превышает 60%, а выполняется эта процедура лишь при увеличенных лимфоузлах .

Поражение регионарных лимфатических узлов при инвазивном раке мочевого пузыря является крайне неблагоприятным прогностическим фактором. Показано, что после цистэктомии 50% больных умирают в течение 12 месяцев с регионарными метастазами в лимфатические узлы и 87% в течение 24 месяцев; пятилетняя выживаемость составляет менее 7%. Расширенная лимфодиссекция и системная химиотерапия достоверно улучшает выживаемость этих больных, поэтому дооперационная диагностика метастазирования в лимфоузлы может существенно повлиять на выбор тактики лечения в этой группе больных .

Кроме глубины инвазии опухоли и метастатического поражения лимфатических узлов, на прогноз МИРМП влияет степень злокачественности переходно-клеточной карциномы. Однако при мышечно-инвазивном РМП, как правило, не встречаются уротелиальные опухоли с низким злокачественным потенциалом или высокодифференцированные (G1) карциномы. Во всех случаях определяется уретериальный рак высокой степени злокачественности (G2 или G3 по классификации ВОЗ, 1973). В связи с этим дальнейшая дифференциация МИРМП не несет никакой прогностической информации .

Ошибки в стадировании заболевания на основании клинических и рутинных гистологических исследований стимулировали интерес к иммуногистохимии, позволяющей прогнозировать характер течения болезни у каждого конкретного больного на основании изучения молекулярных маркеров. Наиболее изученными генами, вовлеченными в регуляцию клеточного цикла, являются гены-супрессоры опухоли p53 и p21. Ген р53 регулирует клеточный цикл и апоптоз, контролирует целостность генома. Активируясь в ответ на самые разные неблагоприятные воздействия, p53 осуществляет на транскрипционном уровне одновременно и активацию гена bax, и супрессию гена bcl-2, отвечающих за апоптоз. При развитии неоплазий, в том числе и переходно-клеточных карцином, часто отмечаются соматические мутации гена р53. Мутации Р53 при карциномах уротелия выявляют в 29-53% случаях, однако мнения авторов о прогностической ценности этого показателя противоречивы .

Пролиферативная активность клетки может быть оценена при помощи различных методик. К ним относятся подсчет количества митозов Ki-67-позитивных клеток, выявление антигена ядра пролиферирующей клетки (PCNA), Р63. Антитела к Ki-67 применяют для оценки пролиферативной активности многих новообразований. Его прогностическая ценность доказана при поверхностном раке мочевого пузыря. Исследование Ki-67 позволяет прогнозировать темп роста опухоли и реакцию опухоли на проводимую химиотерапию. Ki-67 так же является независимым прогностическим фактором в отношении рецидивирования у больных с поверхностными формами РМП, имеющих высокий риск [6]. Сведения о влиянии Ki-67 на прогноз у больных с МИРМП противоречивые и изучены недостаточно.

Цель исследования : провести сравнительную оценку эффективности различных иммуногистохимических маркеров в определении стадии и прогнозе мышечно-инвазивного РМП.

Материалом для исследования послужил операционный материал 80 пациентов с новообразованиями мочевого пузыря, проходивших лечение в НИИ клинической и фундаментальной уронефрологии СГМУ и группе контроля (таб.1).

Операционный и биопсийный материалы были фиксированы в 10% -ном растворе нейтрального формалина и залиты в парафин. Срезы толщиной 5-7 мкм, окрашенные гематоксилином и эозином, были подвергнуты обзорному морфологическому анализу, при котором стадию рака определяли в соответствии с классификацией TNM, а степень дифференцировки опухолевых клеток оценивали в соответствии с рекомендациями ВОЗ, 2004. Изучение препаратов было проведено с применением бинокулярного микроскопа «Micros MC100» при 600-кратном увеличении (объектив - 40х, бинокулярная насадка - 1,5х, окуляры - 10х). Материал был разделен по группам с учетом клинической стадии рака. Всего было исследовано 94 образца.

Исследовано 3120 срезов, окрашенных гематоксилином и эозином, и на 12 различных маркеров.

Для иммуногистохимического исследования были использованы 12 коммерческих моноклональных антител, разделенных на группы по функциональной значимости:

• маркеры пролиферативной активности -Ki67, PCNA, p63,
• супрессор опухолевого роста - р53,
• маркер апоптоза Bcl2,
• рецептор эпидермального фактора роста - EGFR,
• цитокератиновый профиль - ЦК7, ЦК8, ЦК10/13, ЦК17, ЦК18, ЦК19.

Методика иммуногистохимического окрашивания

Иммуногистохимические реакции ставили на серийных парафиновых срезах (5мкм), используя стрептавидин-биотиновый метод. В качестве детекционной системы применяли систему LSAB2 System, HRP (K0675), Dako, в качестве хромогена - диаминобензидин (Dako).

Интенсивность реакций, локализованных в цитоплазме (цитокератины 7,8,13, 17,18,19) и на мембранах клеток (EGFR) оценивали полуколичественным способом по балльной шкале от 0 до 3 с помощью светового бинокулярного микроскопа «MicrosMC100», учитывая выраженность реакции и ее локализацию: 0 - отсутствие реакции, 1 - слабая реакция, 2 - умеренная реакция, 3 - сильная реакция.

Результаты реакций с антигенами, имеющими ядерную локализацию (PCNA, Ki67, p53, p63, bcl2), оценивали, подсчитывая количество окрашенных ядер на 100 ядер в 3 полях зрения, выражая полученные результаты в процентах.

Результаты реакций с антигенами, имеющими ядерную локализацию (PCNA, Ki67, p53, p63, bcl2) оценивали по системе подсчета histochemicalscore . Система подсчета включает в себя интенсивность иммуногистохимической окраски по 3-х бальной шкале и долю (%) окрашенных клеток и представляет собой сумму произведений процентов, отражающих долю клеток с различной интенсивностью окраски на балл, соответствующий интенсивности реакции. Интенсивность окраски 0 - нет окрашивания, 1 - слабое окрашивание, 2- умеренное окрашивание, 3 - сильное окрашивание.

Формула подсчета следующая: histochemicalscore = ∑ P (i) х i,

где i - интенсивнось окрашивания, выраженная в баллах от 0 до 3. P (i) - процент клеток, окрашенных с разной интенсивностью. Максимальное значение гистосчета должно соответствовать 300.

Статистический анализ проводили с использованием пакета программ статистической обработки результатов SSPS 13.0 forWindows.

Результаты. При иммуногистохимическом исследовании 12 онкомаркеров было установлено, что для установления стадии рака мочевого пузыря и прогноза заболевания рационально использовать только 4: маркеры пролиферативной активности Ki67, p63, супрессор опухолевого роста - р53 и рецептор эпидермального фактора роста — EGFR. В таблице 2 дана сравнительная оценка эффективности иммуногистохимических маркеров для определения стадии РМП.

Из таблицы 2 видно, что все эти маркеры не дают положительной экспрессии в группе сравнения, что может использоваться при дифференциальной диагностике

РМП и других неоплазий. Кроме этого, процент экспрессирующих клеток указанных маркеров позволяет судить о степени инвазии РМП, что является важным моментов для определения стадии заболевания, следовательно, и прогноза. Именно поэтому Ki 67 весьма перспективно можно использовать для дифференциальной диагностики между Т2 и Т3-Т4, что является весьма важным, так как выход опухоли за пределы органа свидетельствует о неблагоприятном прогнозе. Он может быть использован, как прогностический, способный повлиять на выбор тактики лечения у больных МИРМП.

При анализе показателей экспрессии маркеров в каждой из стадий РМП, представленной в таблице 3, установлено, что маркер Ki 67 показал 100% -ную экспрессию у пациентов со стадией РМП Т3 и Т4, в то время как в стадии Т2 его экспрессия составила только 56,5%, что является достоверным различием.

С целью изучения прогностической значимости были изучены отдаленные результаты лечения 27 больных РМП, чью судьбу удалось проследить на протяжении 5 лет. У всех пациентов при иммуногистохимическом исследовании ткани опухоли Ki 67 дал положительную экспрессию.

Из 27 больных РМП 11 пациентам выполнено органосохраняющее, комплексное лечение, включающее в себя трансуретральную электрорезекцию стенки мочевого пузыря вместе с опухолью и системную полихимиотерапию по схеме M-VAC (метотрексат, винбластин, доксорубицин, цисплатин). У 13 больных произведена цистэктомия, а 6 пациентов признаны иноперабельными; им осуществляли только симтоматическую терапию.

Из таблицы 4 видно, что из 27 больных РМП - 16(59,2%) умерло. Из них 10 (62,5%) - в первый год. Из 10 умерших в первый год 9 (90%) пациентов имели экспрессию Ki 67 ≥ 30%. У всех 9 больных стадия заболевания была Тзb-T4N0-1M0-1.

В то же время из 11 больных РМП, которые прожили более 5 лет, в 70% экспрессия Ki 67 составила < 30%. Стадия заболевания у выживших больных, была Т1N0M0- 4; Т2N0M0- 6; Т3N0M0-1.

Таким образом, независимо от способа лечения с достоверностью в 81,2% Ki67 может предсказать неблагоприятный исход заболевания в течение 24 месяцев.

При мышечноинвазивном РМП Т2N0M0-Т3-4N0-1M0-1 (22 больных) в первые 24 месяца умерли 14(62%). Экспрессия Ki 67у этих больных колебалась от 30 до 80%.

При органосохраняющем лечении больных в стадии Т1-Т2 (11 пациентов) в первые два года умерло 5(45,4%) больных, у которых экспрессия Ki 67 составляла ≥30%.После цистэктомии (n=13) умерли 8(61,5%), у 7(87,5%) из них Kj 67 был >30%. Из 11, проживших 5лет и более лет только в двух случаях Kj 67 было >30% (34 и 44), у остальных - 9 (82%) Ki67 был менее 30%.

Заключение. Проведенная сравнительная оценка эффективности различных иммуногистохимических маркеров в стадировании и прогнозе мышечно-инвазивного РМП показала, что наиболее эффективным маркером является маркер пролиферативной активности - Ki 67. Установлено, что при экспрессии

Ki 67 >30%, независимо от способа лечения, с достоверностью в 81, 2% возможны рецидив заболевания и летальный исход в течение 24 месяцев. В то же время при значениях Ki67 < 30% пятилетняя выживаемость составляет 70%.

Таким образом, маркер пролиферативной активности - Ki 67 может быть вспомогательным прогностическим фактором при выборе объема оперативного лечения (органосохраняющая операция или цистэктомия).

Литература

1. Анализ уронефрологической заболеваемости и смертности в Российской Федерации в 2010-2011 годах / О.И.Аполихин, А.В.Сивков, Н.Г. Москалева и соавт. //Экспериментальная и клиническая урология.- 2013.-№2.- С.10-17.
2. Metastases from transitional cell carcinoma of urinary bladder/ R.J. Babaian, D.E. Johnson, L. Llamas, A.G. Ayala// Urology. -1980.-16(2):142-144.
3. Biology and management of bladder cancer/ D. Raghavan, W.U. Shipley, M.B. Garnick, P.J. Russell, J.P.Richie. N .Engl //J Med. -1990.-322(16):1129-1138.
4. Radical cystectomy in the treatment of invasive bladder cancer: long-term results in 1,054 patients/ J.P. Stein, G. Lieskovsky, R. Cote et al.// J Clin Oncol.- 2001.-19(3):666-675.
5. Сафиуллин К.Н. Лечение немышечно-инвазивного рака мочевого пузыря: автореф. дис… д-ра. мед. наук.- Обнинск, 2012.- 48 с.
6. Матвеев Б.П.Клиническая онкоурология. - /М.: 2011.- С.-934.
7. 8. Онкоурология: национальное руководство /под ред. акад. РАМН В.И. Чисова, проф.Б.Я.Алексеева, проф.И.Г.Русакова.- М.: ГЭОТАР-Медиа, 2012.- 688 с.
8. Микич Д.Х. Органосохраняющее лечение при инвазивном раке мочевого пузыря// Онкоурология.- 2005, №2.-С.27-32.
9. Джером П. Рич Энтони В.Д. Амико Онкоурология/пер. с англ под ред. член-корр. РАМН, проф. О.Б.Лорана - М.: Изд-во БИНОМ, 2011.-896 с.
10. Limitations of computerized tomography in stagig invasive bladder cancer before radical cystectomy/ M.L.Paik, M.J.Scolieri, S.L. Brown et al. //J Urol 2000.- 163(6): 1693 - 6.
11. Лечение и прогноз больных переходноклеточным раком мочевого пузыря с метастазами в регионарные лимфоузлы / Р.В.Хабалов, В.Б.Матвеев, М.И.Волкова, Д.А.Носов //Онкоурология.-2007.-№4.- С.30-36.
12. Grading the invasive component of urothelal carcinoma of the bladder and its relationship with progressionfree survival/ R.E.Jimenez, E.Gheiler, P. S.L. Osranian et al.// AmJ Surg Patohl 2000; 24(7):980-7.
13. Prognostic markers in muscle invasive bladder cancer / R,Tiguert A, Lessar A.So, Y.Fradet // Word J Urol 2002; 20: 190-5.
14. Prognostic significance of p53, bcl-2 and Ki-67 in high risk superficial bladder cancer / N.E.Stavropoulos, I. Filiadis, E. Ioachim et al. //Anticancer Res. 2002.-Vol.22(6B)- P.3759-64.

Таблицы

Таблица 1.Характеристика исследуемых больных

Prognostic and predictive value of Ki-67 in triple-negative breast cancer
Источник: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5058740/

Это исследование состояло в том, чтобы исследовать прогностическую роль Ki-67 в дальнейшей классификации тройного отрицательного рака молочной железы (TNBC) и проверить, может ли высокий уровень экспрессии Ki67 прогнозировать выгоду от карбоплатина. С января 2004 года по декабрь 2012 года 363 пациента, работавшие для TNBC, были идентифицированы через институциональную клиническую базу данных. После медианного наблюдения в течение 34 месяцев (5,2-120,0 месяца) у 62 пациентов (17,1%) наблюдались рецидивы, а 33 пациента (9,1%) умерли от рака молочной железы. При однофакторном анализе высокий индекс Ki-67, а также больший размер опухоли и вовлечение лимфатических узлов были связаны с более короткой безрецидивной выживаемостью (DFS) и общей выживаемостью (ОС). В многофакторном анализе высокий Ki-67 является независимым фактором риска для DFS (коэффициент риска, RR: 2,835, доверительный интервал 95%, 95% ДИ: 1,586-5,068, P

Тройной негативный рак молочной железы (TNBC) представляет собой подгруппу рака молочной железы, лишенную рецептора эстрогенного рецептора (ER) и экспрессии рецептора прогестерона (PR), а также амплификацию рецептора 2 эпителиального фактора роста человека (HER2). С гистологической точки зрения TNBC является общим иммуногистохимическим (IHC) статусом для ряда опухолей с гетерогенными клиническими проявлениями . Недавнее исследование выявило шесть подтипов TNBC, которые показывают уникальные профили . Учитывая биологическое разнообразие в TNBC, необходимо идентифицировать подтипы с лучшим прогнозом, который может быть использован для интенсивной адъювантной терапии, а также для тех, кто нуждается в более агрессивных полках.

Опухолевая активность, важная клеточная функция, тесно связана с поведением опухолей при раке молочной железы . Разработаны различные методы оценки скорости пролиферации, включая митотический счет, оценку клеточной фракции в S-фазе клеточного цикла и определение IHC связанных с пролиферией антигенов. Ki-67 является одним из наиболее широко используемых антигенов пролиферации IHC и подтвержден как независимый прогностический и прогностический фактор раннего рака молочной железы . Значение Ki-67 является важным параметром при подклассификации просвечивающих опухолей в хорошую прогностическую подгруппу Luminal A и подгруппу Luminal B с плохим прогнозом в соответствии с Международным экспертным консенсусом в Санкт-Галлене . Хотя прогностическая ценность уровня Ki-67 в TNBC пока неясна.

Лечение TNBC было сложным. TNBC, как правило, считается проявляющим более агрессивное клиническое поведение и более высокий риск рецидива опухоли и смертности по сравнению с его неттриппенгативными аналогами. Кроме того, отсутствие четко определенных молекулярных целей делает его хуже, и единственной стратегией лечения являются цитотоксические агенты. Платиновая соль является одним из новых агентов при лечении TNBC. Многие исследователи изучили роль цисплатина и карбоплатина для лечения TNBC в неоадъювантной и метастатической обстановке , в то время как добавление карбоплатина на ранней стадии заболевания по-прежнему не имеет убедительных доказательств. Один важный вопрос заключается в том, должны ли все пациенты TNBC подвергаться воздействию карбоплатина, с его токсическими эффектами и высокой скоростью прекращения лечения; или все пациенты с TNBC получат аналогичные результаты от соли платины .

Цель этого исследования состояла в том, чтобы исследовать роль Ki-67 в дальнейшей классификации TNBC на подтипы с различным прогнозом и может ли уровень экспрессии Ki-67 прогнозировать преимущество TNBC от карбоплатина в условиях адъювантной терапии.

В исследование было включено 363 пациента с TNBC. Средний возраст составлял 55 лет (диапазон 23-86). Двести семьдесят пять пациентов (75,8%) подверглись мастэктомии; 324 (89,3%) пациентов прошли химиотерапию. Схемы химиотерапии включали EC (Эпирубицин 100 мг / м2 IV день 1, Циклофосфамид 600 мг / м2 IV день 1, циклически каждые 21 день в течение 4 циклов), EC-T (Эпирубицин 100 мг / м2 IV день 1, Циклофосфамид 600 мг / м2 IV день 1, циклически каждые 21 день в течение 4 циклов, за которым следует доцетаксел 100 мг / м2 IV в день 1, циклически каждые 21 день в течение 4 циклов), TEC (доцетаксел 75 мг / м2 IV день 1, эпирубицин 75 мг / м2 IV день 1, циклофосфамид 600 мг / м2 IV день 1, циклически каждые 21 день в течение 6 циклов), TC (доцетаксел 75 мг / м2 IV день 1, циклофосфамид 600 мг / м2 IV день 1, циклический каждые 21 день в течение 4 циклов), EC -wPCb (эпирубицин 100 мг / м2 IV день 1, циклофосфамид 600 мг / м2 IV день 1, циклический каждые 21 день в течение 4 циклов с последующим паклитакселом 75 мг / м2 IV день 1, площадь карбоплатина 2 · 0 под кривой, циклическая еженедельно для 12 циклов) и wPCb (паклитаксел 75 мг / м2 IV день 1, площадь карбоплатина 2 · 0 под кривой, циклически каждую неделю в течение 12 циклов). Схемы, содержащие как антрациклин, так и таксаны, были использованы у 177 пациентов (48,8%) и 58 (16,0%) пациентов получали платиносодержащую схему. Сто семьдесят один пациент (47,1%) получил лучевую терапию.

Из 363 тройных негативных опухолей 317 (87,3%) были гистологически идентифицированы как инвазивные протоковые карциномы, 17 (4,7%) в качестве апокринных карцином, 9 (2,5%) в качестве медуллярных карцином, 7 (1,9%) в качестве метапластических карцином, 2 (0,6% %) как инвазивные дольковые карциномы, 3 (0,8%) в качестве нейроэндокринной карциномы, 3 (0,8%) в качестве инвазивной папиллярной карциномы, 2 (0,6%) в качестве аденоцистозной карциномы, 1 (0,3%) в качестве миоэпителиальной карциномы, 1 (0,3%), опухоли злокачественных филлодов и 1 (0,3%) в виде муцинозной карциномы.

Средний уровень экспрессии Ki-67 составлял 40%. С 40% в качестве показателя отсечки индекса Ki-67 196 пациентов (54,0%) были классифицированы как низкая экспрессия Ki-67 и 167 пациентов (46,0%) в качестве высокой экспрессии. Характеристики пациентов в сочетании с уровнем экспрессии Ki-67 описаны в таблице 1. Высокий уровень экспрессии Ki- 67 в TNBC был более распространен в IDC по сравнению с не-IDC (p

После медианного периода наблюдения 34,0 месяца (5,2- 120,0 месяцев) наблюдалось 62 первых события (17,1%), у 24 (12,2%) в группе уровня низкого уровня Ki-67 и у 38 (22,8%) в высоких -выражение уровня (X2 = 11.372, p = 0.001). 62 первых события включали 53 рецидива с 30 локорегионарными рецидивами и 44 отдаленными метастазами и 9 другими событиями с 6 контралатеральными раками молочной железы. Все локальные рекуррентные поражения и контралатеральные повреждения груди были доказаны с использованием либо тонкой иглы аспирации, либо биопсии ядра иглы. Тридцать три пациента (9,1%) умерли во время наблюдения, а пациенты с высокой экспрессией Ki-67 имели более высокий уровень смертности (13,2% против 5,6%, Х2 = 13,368, р

(A) 3-летняя DFS была значительно лучше в группе с низким Ki-67, чем в группе с высоким уровнем Ki-67 (90,8% против 78,4% логарифмического ранга p = 0,001) и (B). Более плохая 3-летняя ОС также была обнаружены в группе высокого Ki-67 (98,0% против 90,4% логарифма р = 0,000).

При однофакторном анализе только высокая экспрессия Ki-67, больший размер опухоли, положительность лимфатических узлов были связаны с более короткими DFS и ОС, тогда как другие клинические патологические характеристики, такие как возраст, гистологический подтип и уровень опухоли, не влияли на прогноз. В многофакторном анализе Ki-67 является независимым прогностическим фактором для DFS (коэффициент риска, RR: 2,835, доверительный интервал 95%, 95% ДИ: 1,586-5,068, P

При анализе 3-летней DFS по распределению Ki-67 анализ STEPP показал возможное положительное действие карбоплатина у пациентов с высокопролиферативной опухолью (Ki-67> 40%) (рисунок 2A). На фигуре 2В и на фигуре 2С представлена ​​наблюдаемая доля DFS соответственно для пациентов с «высоким» и «низким» Ki-67, стратифицированными группой лечения. У пациентов с низким уровнем рака молочной железы Ki-67 использование карбоплатина мало добавляет, если таковые имеются, к 3-летнему DFS (HR: 0,608, 95% ДИ: 0,176-2,103). Тем не менее, пациенты в группе высокого Ki-67, по-видимому, имеют замечательные лучшие 3-летние показатели DFS при лечении карбоплатином (HR: 0,478, 95% ДИ: 0,279-0,819). Взаимодействие между Ki-67 и лечением не было статистически значимым (p = 0,346).

(A) План воздействия на эффект субпопуляции (STEPP) 3-летней выживаемости без болезни. (B) Безрецидивная выживаемость в группе высокого уровня Ki-67 (Ki-67> 40%) в соответствии с обработкой карбоплатином. (C) Безрецидивная выживаемость в группе с низким Ki-67 (Ki-67 ≤ 40%) в соответствии с обработкой карбоплатином. Сообщалось о единичных значениях р-значений критерия рангового рейтинга и коэффициентов опасности (HR) (карбоплатин против некарбоплатина).

TNBC представляет собой группу опухолей с плохим прогнозом из-за агрессивной биологии опухоли и отсутствия целевых агентов . Лучшее понимание его биологического поведения имеет важное значение для улучшения результатов для пациентов TNBC. В этом исследовании мы ретроспективно рассмотрели 363 пациента для анализа корреляции уровня экспрессии Ki-67 с клинико-патологическими характеристиками и прогнозом TNBC. Все пациенты, приходящие из одного центра, гарантировали, что качество теста патологических биомаркеров и решение о лечении в основном стабильны.

Использование Ki-67 в качестве прогностического маркера при раке молочной железы широко исследовано, но лишь несколько исследований исследовали его в тройной отрицательной подгруппе . Некоторые исследователи исследовали прогностическую ценность K-67 во всей когорте рака молочной железы, но число случаев в TNBC и Her2 + было довольно небольшим, и это может ограничить способность Ki-67 идентифицировать клинически различные подклассы. Исследование, проведенное в корейской группе , показало, что высокое предохранение от Ki-67 (≥ 10%) было значительно связано с плохой выживаемостью без рецидива и общей выживаемостью в TNBC, несмотря на более высокую скорость патологического полного ответа (pCR) , Munzone et al. сообщили, что индекс маркировки Ki-67 был связан с различными подгруппами прогноза в отрицательно-отрицательном TNBC с предельным значением 35%. В соответствии с этими результатами наше исследование показало, что высокая экспрессия Ki-67 (> 40%) достоверно коррелирует с худшим прогнозом у пациентов с TNBC, независимо от размера опухоли и состояния лимфатических узлов.

Измерение Ki-67 по IHC является недорогим методом, подходящим для широкого использования в клинической практике . Международная Ки-67 в Рабочей группе по раку молочной железы предложила рекомендации по анализу, отчетности и использованию этого потенциально важного маркера на основе имеющихся данных . В этом исследовании строго соблюдались руководящие принципы, которые гарантировали его ценность. В другом ретроспективном исследовании из нашего центра высокая экспрессия Ki-67 коррелировала с ранним рецидивом в Luminal B / Her2 отрицательном раке молочной железы с предельной величиной 30%. Это может отражать стабильность и надежность теста Ki-67 в одном центре.

Точки отсечения индекса Ki-67, используемые в клинических испытаниях и исследованиях, широко различались , варьировались от 10% до 61%. Поскольку исходные значения Ki-67 для тройных отрицательных и HER2-положительных опухолей намного выше, чем для просвечивающих опухолей , выбор отсечки Ki-67 может быть более очевидным, если бы он рассматривался в каждой подгруппе соответственно. В этом исследовании мы выбрали медиану Ki- 67 как срезающую ценность, которая широко использовалась в других исследованиях . Ввиду изменчивости между наблюдателями и между лабораториями требуется гораздо больше доказательств, чтобы установить соответствующую точку отсечения Ki-67 для TNBC.

Время наблюдения нашего исследования относительно невелико. Однако, несмотря на среднее 34-месячное наблюдение, уровень экспрессии Ki-67 показывает его независимую прогностическую ценность в TNBC. Это может быть связано с ранней репликацией TNBC в течение первых трех лет наблюдения . В этом исследовании 94,3% (50/53) рецидив произошел в первые три года после операции.

Ключевым моментом для использования платинового режима было бы выбор правильного пациента. Существует хорошо описанная связь между TNBC и мутациями зародышевой линии BRCA . Неоадъювантные исследования показали высокие показатели pCR среди ассоциированных с BRCA1 раковых опухолей молочной железы, получавших цисплатин . Однако обычное клиническое применение тестов гена BRCA все еще имеет некоторые трудности. Хотя тест Ki-67 более удобен и экономичен и может быть хорошей альтернативой.

В клиническом исследовании GeparSixto добавление неоадъювантного карбоплатина к режиму таксана-антрациклина значительно увеличивает долю pCR пациентов TNBC. Анализ подгруппы показал, что радиодобаток Odds благоприятствует карбоплатину в группе высокого Ki-67 (> 20%) составляет 1,40 (95% ДИ: 0,968-2,02), что выше, чем в группе с низким Ki-67 (OR: 1,09, 95% ДИ: 0,490 -2,4). Аналогичным образом, наше исследование показало возможное положительное действие карбоплатина у пациентов с высокопролиферативной опухолью (Ki-67> 40%) в адъювантной обстановке. Но эту тенденцию еще нужно проверить в дальнейших перспективных, хорошо сбалансированных исследованиях с большим размером выборки.

Одно из возможных ограничений этого исследования может быть связано с гетерогенностью адъювантной терапии, поскольку не все пациенты получали одинаковый режим. Однако мы можем оценить, что среди пациентов, получавших химиотерапию, большинство (72,5%) получали схему, содержащую антрациклин, и более половины из них (55,6%) получали схемы, содержащие как антрациклин, так и таксаны.

В заключение, TNBC представляется гетерогенной группой с различными клиническими результатами. TNBC с высоким потенциалом распространения следует отслеживать чаще всего в течение трех лет и может быть кандидатом на дополнительные послеоперационные методы лечения с различными механизмами, такими как карбоплатин.

Мы собрали информацию о последовательных пациентах с раком молочной железы, перенесших операцию на грудную клетку в период с января 2004 года по декабрь 2012 года в больнице Шанхая Руиджин, через базу данных по раку молочной железы в Комплексном центре здоровья молочной железы. Протокол был одобрен Этическими комитетами Шанхайской больницы Жуйджин, и все пациенты представили свои письменные информированные согласия участнику этого исследования до того, как были собраны клинические и патологические данные.

Было ретроспективно исследовано 363 пациента с TNBC. Исходные данные, включая возраст, характеристики опухоли (размер опухоли, метастазы в лимфатические узлы, отдаленные метастазы, уровень опухоли, патологическую стадию, экспрессию ER / PR / HER2 и гистологический тип) и хирургическую информацию. Решение о лечении для каждого пациента проводилось на ежедневном междисциплинарном совещании, на котором присутствовали хирурги, медицинские онкологи, радиационные онкологи и патологоанатомы.

Опухоли были классифицированы гистологически в соответствии с классификацией опухолей Всемирной организации здравоохранения . Гистологический класс оценивали в соответствии с системой подсчета Элстона и Эллиса . Окрашивание IHC ER, PR, HER2 и Ki-67 проводилось обычно с использованием системы Ventana BenchMark XT (Ventana Medical Systems, Tucson, AZ). Окрашивание IHC проводили на 4 мкм срезах секций ткани с фиксированным парафином (FFPE) с первичными антителами против ER (SP1, 1: 100, Дако, Дания), PR (PgR 636, 1: 100, Дако, Дания), HER2 (4B5, Roche, Швейцария), K-67 (MIB-1, 1: 100, Дако, Дания). Выражение IHC HER2 оценивали следующим образом: 0 (отсутствие окрашивания или слабое окрашивание мембраны), 1+ (слабое окрашивание мембраны в> 10% опухолевых клеток, неполное окрашивание мембраны), 2+ (слабое или умеренное окрашивание мембран в> 10% опухолевых клеток) и 3+ (однородное, интенсивное окрашивание мембран> 30% инвазивных опухолевых клеток). Тест на флуоресценцию in situ гибридизации (FISH) для амплификации гена HER2 был обычно упорядочен, когда HER2 был IHC 2+. FISH выполняли с использованием набора PathVysion HER-2 DNA FISH Kit (Vysis Inc, Downers Grove, IL) в соответствии с инструкциями производителя.

Все гистологические и IHC-опухолевые слайды оценивались двумя патологами. Гистологические оценки и все биологические особенности оценивались на основе инвазивных компонентов.

Обрезание для положительности ER и позитивности PR было 1% положительных опухолевых клеток с ядерным окрашиванием . Положительным для HER2 было либо усиление IHC HER2 3+, либо FISH (отношение HER2 к CEP17 ≥ 2,0 или среднее число копий HER2 ≥ 6,0 сигналов / ячейка) . Индекс Ki-67 выражался как процент положительно ядерных окрашивающих клеток среди по меньшей мере 1000 инвазивных клеток в районе, набранном. Интенсивность окрашивания не имела значения .

Рецидив рака молочной железы определялся как первая доказанная инвазивная локальная / контралатеральная грудь, региональная или отдаленная рецидив в любом месте . Безрецидивная выживаемость (DFS) определялась как интервал от даты первичной операции до первого рецидива, второго первичного инвазивного рака молочной железы или смерти, относящегося к любой причине. Общая выживаемость (ОС) определялась как время от даты первичной операции до момента смерти независимо от рака молочной железы, связанного или нет.

Все значения p менее 0,05 считались статистически значимыми. Все статистические тесты были двусторонними, с доверительным интервалом 95%. Тест Chi-Square использовался для категоризированных переменных (точный критерий Фишера, когда тест Чи-квадрат был недоступен). Кривые выживания были построены методом Каплана-Мейера. Тест логарифмического ранжирования использовался для определения ассоциаций между отдельными переменными и выживаемостью, моделирования логистической регрессии для изучения связи особенностей опухоли с уровнем экспрессии Ki-67 и регрессионным анализом пропорциональных рисков Кокса для выявления значимых прогностических факторов в TNBC. Статистический анализ проводился в SPSS версии 17.0 (SPSS, Inc., Чикаго, Иллинойс).

Взаимодействие между использованием карбоплатина и K-67 было графически оценено с использованием методологии Pattern of Pattern of Surpopulation (STEPP) . Вкратце, метод STEPP использует подход с раздвижными окнами для определения нескольких перекрывающихся субпопуляций пациентов в соответствии с непрерывным ковариатом, таких как Ki-67, и вычисляет результирующие эффекты лечения, оцениваемые в каждой субпопуляции. Анализ STEPP проводился с программным обеспечением R (http://cran.r-project.org/) с пакетом «STEPP».

Это исследование было профинансировано Национальным научным фондом Китая 81572581. Финансисты не играли никакой роли в разработке исследований, сборе и анализе данных, решении опубликовать или подготовить рукопись. Это расследование было представлено в виде стендовых обсуждений в Конгрессе EMSO Asia 2015, 18-21 декабря 2015 г., Сингапур.