साल्मोनेला के सांस्कृतिक गुण। साल्मोनेलोसिस का सूक्ष्मजीवविज्ञानी निदान। पारिस्थितिकी और महामारी विज्ञान

साल्मोनेला के अलावा, टाइफाइड बुखार और पैराटाइफाइड ए और बी के प्रेरक एजेंट, 2,400 से अधिक रोगजनक साल्मोनेला सेरोवर का वर्णन किया गया है जो मनुष्यों में तीव्र गैस्ट्रोएंटेराइटिस का कारण बनते हैं, टाइफाइड जैसे और रोग के सेप्टिकोपाइमिक रूप, साल्मोनेलोसिस नाम के तहत एकजुट होते हैं। साल्मोनेलोसिस के मुख्य प्रेरक एजेंट हैं: साल्मोनेला सेरोवर एंटरिटिडिस, टाइफिम्यूरियम, हैजा, हाइफ़ा आदि।

बैक्टीरियोलॉजिकल विधिसाल्मोनेलोसिस (योजना 10) के प्रयोगशाला निदान में अग्रणी तरीका है। साल्मोनेला संस्कृतियों को अक्सर रोगियों के मल से अलग किया जा सकता है, कुछ हद तक उल्टी और गैस्ट्रिक पानी से धोना, और शायद ही कभी रक्त, मूत्र और पित्त से। रक्त, अस्थि मज्जा, मस्तिष्कमेरु द्रव, उल्टी और गैस्ट्रिक पानी से साल्मोनेला का अलगाव साल्मोनेलोसिस के निदान की पुष्टि करता है। साल्मोनेला वाहक मल, मूत्र और पित्त में पाए जा सकते हैं।

परीक्षण सामग्री को बिस्मथ-सल्फाइट अगर के साथ प्लेटों पर और संचय मीडिया (मैग्नीशियम, सेलेनाइट) में टीका लगाया जाता है, जिसमें से 6-10 घंटों के बाद, बिस्मथ-सल्फाइट अगर पर फिर से बोया जाता है। फसलों को 37 0 C के तापमान पर उगाया जाता है, दूसरे दिन काली कॉलोनियों का चयन किया जाता है और शुद्ध संस्कृति को संचित करने के लिए Olkenitsky (या Ressel) माध्यम पर टीका लगाया जाता है। . अध्ययन के तीसरे दिन, पृथक शुद्ध संस्कृतियों को "विभिन्न" श्रृंखला के मीडिया में उपसंस्कृत किया जाता है और आरए को पॉलीवलेंट और समूह (ए, बी, सी, डी, ई) adsorbed साल्मोनेला सेरा के साथ रखा जाता है। . यदि सीरा के समूहों में से एक के साथ एक सकारात्मक परिणाम प्राप्त होता है, तो आरए इस समूह की adsorbed ओ-सेरा विशेषता के साथ किया जाता है, और फिर मोनोरिसेप्टर एच-सेरा (गैर-विशिष्ट और विशिष्ट चरणों) के साथ साल्मोनेला के सेरोग्रुप और सेरोवर को निर्धारित करने के लिए किया जाता है। कॉफ़मैन-व्हाइट योजना के अनुसार।

अध्ययन के चौथे दिन, "भिन्न" श्रृंखला के मीडिया में परिवर्तन को ध्यान में रखा जाता है (तालिका 10)। साल्मोनेलोसिस के प्रेरक एजेंट साल्मोनेला पैराटाइफाइड बी के समान हैं , लैक्टोज और सुक्रोज को किण्वित न करें, एसिड और गैस के निर्माण के साथ ग्लूकोज, मैनिटोल और माल्टोज को तोड़ें, इंडोल न बनाएं और (कुछ अपवादों के साथ) हाइड्रोजन सल्फाइड का उत्सर्जन करें।

योजना 10. साल्मोनेलोसिस का सूक्ष्मजैविक निदान।

जैव परख।रोगी की सामग्री से सफेद चूहों का मौखिक संक्रमण होता है, जो 1-2 दिनों में सेप्टीसीमिया से मर जाते हैं। जब दिल से रक्त और आंतरिक अंगों से सामग्री बोते हैं, तो साल्मोनेला संस्कृति अलग हो जाती है।

सीरोलॉजिकल स्टडी -साल्मोनेला पॉलीवैलेंट और समूह (समूह ए, बी, सी, डी, ई) निदान के साथ 7-10 दिनों के अंतराल पर लिए गए रोगियों के युग्मित रक्त सीरा के आरएनजीए का उपयोग करके एक अध्ययन। एंटीबॉडी टिटर में चार या अधिक गुना वृद्धि नैदानिक ​​​​मूल्य की है।

छात्रों का स्वतंत्र कार्य

साल्मोनेलोसिस के निदान के लिए विधि की बैक्टीरियोलॉजिकल परीक्षा के मुख्य चरणों का अध्ययन करना।

1. लेविन और ओल्केनित्सकी के माध्यम (प्रदर्शन) पर साल्मोनेला संस्कृतियों के लिए लेखांकन।

2. संपन्न साल्मोनेला संस्कृति का शुद्धता नियंत्रण(ओल्केनित्सकी के वातावरण से एक स्मीयर तैयार किया गया था, इसे ग्राम के अनुसार दाग दिया गया था)। माइक्रोस्कोपिक रूप से और साल्मोनेलोसिस एस के रोगजनकों के प्रदर्शन माइक्रोप्रेपरेशन को ड्रा करें। एंटरिका एसपीपी एंटरिकासेवा आंत्रशोथ , टाइफिम्यूरियम , हैजा साल्मोनेलोसिस के प्रेरक एजेंट गोल सिरों के साथ आकारिकी में समान ग्राम-नकारात्मक छड़ें हैं।

3. पृथक रोगज़नक़ संस्कृति की पहचान:

- एंटीजेनिक गुणों द्वारा- कॉफ़मैन-व्हाइट स्कीम के अनुसार डायग्नोस्टिक मोनोरिसेप्टर साल्मोनेला एग्लूटीनेटिंग ओ- और एच सेरा के साथ ग्लास पर अनुमानित एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया के लिए लेखांकन;

- जैव रासायनिक गुणों द्वारा- गिस या पेशकोव (प्रदर्शन) की "भिन्न" श्रृंखला के अनुसार अध्ययन की गई संस्कृति की जैव रासायनिक गतिविधि का निर्धारण। ग्लूकोज के टूटने, लैक्टोज और सुक्रोज के टूटने की अनुपस्थिति पर ध्यान दें।

- फागोलिज़ेबिलिटी द्वारा(फेज के साथ एक नमूने के लिए लेखांकन - प्रदर्शन)

4. पेपर डिस्क विधि का उपयोग करके एंटीबायोटिक दवाओं के लिए पृथक संस्कृति की संवेदनशीलता का निर्धारण(प्रदर्शन)।

जीनस साल्मोनेला में टाइफाइड बुखार के प्रेरक एजेंट शामिल हैं एस। टाइफी, पैराटाइफाइड्स - एस। पैराटाइफी ए, एस। स्कोटमुएलेरी और फूड पॉइजनिंग के रोगजनकों, जिन्हें साल्मोनेलोसिस कहा जाता है।

आकृति विज्ञान और टिंक्टोरियल गुण।एस। टाइफी, एस। पैराटाइफी ए, एस। स्कोटमुएलेरी - गोल सिरों वाली छोटी छड़ें, पेरिट्रिचस फ्लैगेला, ग्राम-नेगेटिव है।

खेती और एंजाइमेटिक गुण।डिफरेंशियल डायग्नोस्टिक मीडिया (एंडो, लेविना) पर वे पारदर्शी रंगहीन कॉलोनियां बनाते हैं। साल्मोनेला में सैक्रोलाइटिक गुण होते हैं: एस। टाइफी ग्लूकोज, माल्टोज, मैनिटोल से एसिड, एस। पैराटाइफी और एस। स्कोटमुएलेरी - को किण्वित करता है। एक ही चीनी, लेकिन एसिड और गैस के लिए, जो एक विभेदक नैदानिक ​​​​संकेत के रूप में कार्य करता है। एस टाइफी और एस स्कोट्टमुएलेरी प्रोटीन के अपघटन से हाइड्रोजन सल्फाइड पैदा होता है। जिलेटिन तरलीकृत नहीं है।

साल्मोनेला की एंटीजेनिक संरचना और विष निर्माण।साल्मोनेला में ओ-एंटीजन-लिपोपॉलीसेकेराइड-प्रोटीन कॉम्प्लेक्स होता है, जो एंडोटॉक्सिन के समान होता है, एच-एंटीजन और के-एंटीजन - सतह, शेल, कैप्सुलर। साल्मोनेला की पहचान एंटीजेनिक गुणों के अनुसार की जाती है, कॉफमैन और व्हाइट द्वारा प्रस्तावित वर्गीकरण के अनुसार और निम्नलिखित सिद्धांत के अनुसार निर्मित: ओ-एंटीजन की समानता से सभी साल्मोनेला को लैटिन वर्णमाला के बड़े अक्षरों द्वारा इंगित समूहों में विभाजित किया जाता है (ए , बी, सी, डी, ई, आदि।); प्रत्येक ओ-समूह के भीतर, साल्मोनेला को एच-एंटीजन की विभिन्न संरचना के आधार पर सीरोलॉजिकल रूपों में विभाजित किया जाता है, जो लैटिन वर्णमाला और संख्याओं के निचले अक्षर द्वारा इंगित किया जाता है। एच-एंटीजन में, दो चरणों को प्रतिष्ठित किया जाता है: पहला - विशिष्ट और दूसरा - गैर-विशिष्ट। साल्मोनेला की पहचान करते समय, डायग्नोस्टिक एग्लूटीनेटिंग adsorbed सीरा का उपयोग किया जाता है।

एस टाइफी की जटिल एंटीजेनिक संरचना में ओ-, एच- और वी-एंटीजन शामिल हैं, लेकिन इस तरह के एंटीजेनिक रूप से पूर्ण बैक्टीरिया केवल रोग की ऊंचाई पर ही अलग-थलग होते हैं, और वी-एंटीजन स्वस्थ्य अवधि के दौरान और उपसंस्कृति के दौरान खो जाते हैं। प्रयोगशाला।

प्रतिरोध।साल्मोनेला बाहरी वातावरण में काफी स्थिर है। स्थितियों (तापमान, आर्द्रता, सूर्यातप, आदि) के आधार पर, वे एक वर्ष तक चल सकते हैं। निस्संक्रामक कुछ ही मिनटों में साल्मोनेला की मृत्यु का कारण बनते हैं, 60 डिग्री सेल्सियस तक गर्म होते हैं - 10-15 मिनट के बाद।

जानवरों के लिए रोगजनकता।टाइफाइड बुखार और पैराटाइफाइड बुखार केवल लोगों को प्रभावित करता है।

रोग के नैदानिक ​​​​लक्षण तापमान में क्रमिक वृद्धि, सामान्य अस्वस्थता की विशेषता है, जो शरीर के गहरे नशे की स्थिति में बदल जाता है, जिसके लिए रोग को टाइफस कहा जाता था। यह स्थिति एंडोटॉक्सिन की क्रिया के कारण होती है, जो रोग की ऊंचाई पर, रोगाणुओं की सामूहिक मृत्यु के परिणामस्वरूप बड़ी मात्रा में जारी होती है, जो परिणामी एंटीबॉडी द्वारा सुगम होती है।

रक्त के साथ बैक्टीरिया यकृत, प्लीहा, अस्थि मज्जा, छोटी आंत के लिम्फ नोड्स में प्रवेश करते हैं, जहां वे गुणा करते हैं, रक्त को रोगजनक के साथ समृद्ध करते हैं। पैरेन्काइमल प्रसार का चरण शुरू होता है। बड़ी मात्रा में पित्ताशय की थैली में जमा होने वाले साल्मोनेला, दूसरी बार छोटी आंत में प्रवेश करते हैं और लसीका संरचनाओं में गुणा करते हैं, जो सूजन, नेक्रोटिक, अल्सर हो जाते हैं, जिससे आंतों की दीवार का विनाश हो सकता है, अर्थात। वेध - टाइफाइड बुखार की सबसे गंभीर जटिलताओं में से एक। पित्ताशय की थैली में टाइफाइड बैक्टीरिया के प्रजनन के लिए विशेष रूप से अनुकूल परिस्थितियां पाई जाती हैं, जहां वे सबसे लंबे समय तक रहते हैं और आंत में छोड़े जाने पर, इसके रोग संबंधी घावों को तेज करते हैं। माइक्रोबियल अलगाव का उत्सर्जन-एलर्जी चरण रोगजनन के अगले चरण का गठन करता है। न केवल मल के साथ, बल्कि मूत्र, दूध पिलाने वाली मां के दूध से भी बैक्टीरिया शरीर से निकल जाते हैं। विशिष्ट एंटीबॉडी के अनुमापांक में वृद्धि के साथ, उत्सर्जन चरण पुनर्प्राप्ति के चरण में गुजरता है।

रोग प्रतिरोधक क्षमता।टाइफाइड और पैराटाइफाइड रोगजनकों के कारण होने वाले संक्रमणों के लिए कोई जन्मजात प्रतिरक्षा नहीं है। स्थानांतरित रोग एक मजबूत प्रतिरक्षा छोड़ देता है और पुन: संक्रमण के मामले दुर्लभ हैं। हालांकि, पुनरावर्तन संभव है, और जो लोग टाइफाइड बुखार से उबर चुके हैं, वे पुराने जीवाणु वाहक बन जाते हैं।

साल्मोनेला का प्रयोगशाला निदान।निदान महामारी विज्ञान के आंकड़ों और नैदानिक ​​लक्षणों को ध्यान में रखता है। रोग के पहले दिन से रक्त की जांच करना आवश्यक है। रक्त संवर्धन विधि एक निर्णायक और प्रारंभिक विधि है। सबसे अच्छा वैकल्पिक पोषक माध्यम पित्त माध्यम है, जो रक्त सीरम के एंटीबॉडी, जीवाणुनाशक गुणों को निष्क्रिय करता है। अस्थि मज्जा, मूत्र, गुलाबोला से रोगज़नक़ की संस्कृति को अलग करना संभव है, लेकिन इन विधियों का उपयोग शायद ही कभी किया जाता है। स्वास्थ्य लाभ की अवधि के दौरान, रोगज़नक़ को मल से अलग कर दिया जाता है। पृथक संस्कृतियों की पहचान जैव रासायनिक और एंटीजेनिक गुणों द्वारा की जाती है।

साल्मोनेला के प्रकार का निर्धारण करते समय, पहले पॉलीवलेंट सीरम के साथ एक एग्लूटिनेशन प्रतिक्रिया की जाती है, जिससे यह निर्धारित करना संभव हो जाता है कि क्या पृथक संस्कृति जीनस साल्मोनेला से संबंधित है, फिर समूह अलग समूह adsorbed सेरा का उपयोग करके निर्धारित किया जाता है, और फिर साल्मोनेला का प्रकार मोनोरिसेप्टर विशिष्ट एच-सेरा के साथ एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया में निर्धारित किया जाता है।

कॉम्ब्स प्रतिक्रिया का उपयोग करके अपूर्ण एंटीबॉडी का पता लगाकर और 4-5 वें दिन से रोगियों के सीरम का अध्ययन रोग के पहले दिनों में किया जा सकता है - विडाल प्रतिक्रिया में पूर्ण एंटीबॉडी, जिसे क्रम में कुछ दिनों के बाद दोहराया जाता है एंटीबॉडी टिटर में वृद्धि का निर्धारण करने के लिए। हालांकि, विडाल प्रतिक्रिया (प्रतिक्रिया की सादगी, त्वरित प्रतिक्रिया प्राप्त करना, पूर्वव्यापी निदान की संभावना) को स्थापित करने के लाभों के साथ, विधि के नुकसान भी हैं: यह जल्दी नहीं है, एंटीबॉडी दोनों बीमारों में पाए जा सकते हैं व्यक्ति (एनामेनेस्टिक प्रतिक्रिया) और टीकाकरण ("टीकाकृत विडाल")। इस तथ्य को भी ध्यान में रखना आवश्यक है कि एच-एंटीबॉडी लंबे समय तक बनी रहती है, और ओ-एंटीबॉडी एक बीमार व्यक्ति के रक्त से जल्दी से गायब हो जाते हैं।

टाइफाइड बुखार के रोगियों के रक्त सीरम में एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए, एक अप्रत्यक्ष रक्तगुल्म प्रतिक्रिया (RIHA) का उपयोग किया जाता है।

बैक्टीरिया वाहक की पहचान करना मुश्किल है। बैक्टीरियोलॉजिकल अध्ययन, जो खाद्य उद्यमों और बच्चों के संस्थानों में श्रमिकों की आवधिक परीक्षाओं के दौरान बड़े पैमाने पर प्रकृति के होते हैं, बहुत समय लेते हैं और हमेशा प्रभावी नहीं होते हैं, क्योंकि एक ज्ञात वाहक से भी एक सूक्ष्म जीव को अलग करना मुश्किल है। वर्तमान में, वाहक का पता लगाने के लिए वाहक सीरम के साथ सीरोलॉजिकल विधि-प्रतिक्रिया वी-हेमाग्लगुटिनेशन का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। रासायनिक प्रकृति द्वारा वी-एंटीजन एक पॉलीसेकेराइड है, इसे अपने शुद्ध रूप में निकाला जाता है और 0 मानव रक्त समूह के एरिथ्रोसाइट्स की सतह पर सोख लिया जाता है। वी-एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम के साथ बातचीत करते समय वाहक सीरम एक रक्तगुल्म प्रतिक्रिया का कारण बनता है। छोटे तनुकरणों में वाहक अभिक्रिया धनात्मक होती है। वी-हेमग्लगुटिनेशन प्रतिक्रिया द्वारा पहचाने गए वाहकों की जांच बैक्टीरियोलॉजिकल विधियों (मल से संस्कृति का अलगाव, ग्रहणी सामग्री) द्वारा की जाती है।

यदि आवश्यक हो, तो रोगों की महामारी विज्ञान व्याख्या के लिए, अलग-अलग संस्कृतियों को वी-बैक्टीरियोफेज का उपयोग करके विभेदित किया जाता है, जिसमें सख्त प्रकार की विशिष्टता होती है। फेज टाइपिंग करते समय 78 प्रकार के वी-बैक्टीरियोफेज का उपयोग किया जाता है, जिसकी सहायता से इन जीवाणुओं के समान संख्या में फेज प्रकार का पता लगाया जाता है। फेज टाइपिंग विधि संक्रमण के कथित स्रोतों को स्थापित करना या बाहर करना संभव बनाती है, महामारी विज्ञान संबंधों का पता लगाती है, स्थानीय मामलों को "आयातित" और छिटपुट बीमारियों को महामारी से अलग करती है।

साल्मोनेला की महामारी विज्ञान।संक्रमण का स्रोत और भंडार केवल एक व्यक्ति है: रोगी या वाहक। संचरण का तंत्र फेकल-ओरल है, प्रसार के मार्ग सीधे संपर्क के माध्यम से होते हैं, संक्रमित भोजन (दूध) के साथ, सीवेज से दूषित पानी। वर्तमान में अपेक्षाकृत कम घटना के साथ, संचरण का संपर्क-घरेलू मार्ग प्राथमिक महत्व का है - दूषित हाथों, व्यंजन, लिनन, आदि के माध्यम से। घटना गर्मी-शरद ऋतु के मौसम की विशेषता है।

विशिष्ट उपचार और रोकथाम।रोगियों के उपचार के लिए, ब्रॉड-स्पेक्ट्रम एंटीबायोटिक्स, टेट्रासाइक्लिन समूह और क्लोरैम्फेनिकॉल का उपयोग किया जाता है। हालांकि, एंटीबायोटिक थेरेपी, रिलैप्स और लंबे समय तक बैक्टीरियल कैरिज को नहीं रोकती है। नैदानिक ​​​​स्थितियों में एंटीबायोटिक दवाओं की कार्रवाई के तंत्र का अध्ययन करने वाले सोवियत और विदेशी शोधकर्ताओं ने इस तथ्य पर ध्यान आकर्षित किया कि उनकी प्रभावशीलता विशिष्ट प्रतिरक्षा के विकास की डिग्री से निकटता से संबंधित है। इसलिए, एंटीबायोटिक दवाओं के अलावा, उन एजेंटों के साथ इलाज करने की सिफारिश की जाती है जो विशेष रूप से इम्यूनोजेनेसिस (कॉर्पसकुलर वैक्सीन, आंशिक एंटीजन) को उत्तेजित करते हैं। टाइफाइड बुखार के रोगियों में जटिल इम्युनोएंटीबायोटिक थेरेपी (एंटीबायोटिक्स और अलग-अलग मोनोवैक्सीन और वी-एंटीजन) के साथ, रिलेप्स की आवृत्ति काफी कम हो जाती है, एक बैक्टीरियोकैरियर का गठन नहीं होता है।

रोकथाम के उद्देश्य से, वी-एंटीजन से समृद्ध एक टाइफाइड अल्कोहल वैक्सीन का उपयोग किया जाता है (महामारी के संकेतों के अनुसार)। सैन्य कर्मियों के टीकाकरण के लिए, एक रासायनिक adsorbed टाइफाइड-पैराटाइफाइड-टेटनस वैक्सीन (TABle) का उपयोग किया जाता है, जिसमें टाइफाइड, पैराटाइफाइड ए और बी बैक्टीरिया और शुद्ध टेटनस टॉक्साइड से पृथक जटिल एंटीजन होते हैं।

अधिकांश रोगजनक हैं प्रकार, कारण सलमोनेलोसिज़(टाइफोपैराटाइफाइड रोग, खाद्य विषाक्तता)।

(स्रोत: "माइक्रोबायोलॉजी: शब्दों की शब्दावली", फिरसोव एन.एन., एम: बस्टर्ड, 2006 .)

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साल्मोनेला- (एनई /) नेल; कृपया (संयुक्त राष्ट्र सैल्मोन / एलएलए, एस; जी।) आंतों के जीवाणुओं का एक जीन जो जानवरों और मनुष्यों में संक्रामक रोगों का कारण बनता है। इन जीवाणुओं की खोज करने वाले अमेरिकी रोगविज्ञानी डी.ई. सैल्मन के नाम से... कई भावों का शब्दकोश

साल्मोनेला- इस लेख में सूचना के स्रोतों के लिंक का अभाव है। जानकारी सत्यापन योग्य होनी चाहिए, अन्यथा उस पर प्रश्नचिह्न लगाया जा सकता है और उसे हटाया जा सकता है। आप कर सकते हैं ... विकिपीडिया

सलमोनेलोसिज़- मैं (साल्मोनेलोसिस) संक्रामक रोग, जिसमें स्पर्शोन्मुख गाड़ी से लेकर गंभीर सेप्टिक प्रवाह तक विभिन्न प्रकार की नैदानिक ​​​​अभिव्यक्तियाँ होती हैं, अधिक बार गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल रूपों (गैस्ट्रोएंटेराइटिस, ... के रूप में होता है) चिकित्सा विश्वकोश

जीनस साल्मोनेलायह आकार में 0.7-1.5x2-5 माइक्रोन, गोल सिरों वाले छोटे लम्बी बैक्टीरिया द्वारा दर्शाया जाता है। बैक्टीरिया में कैप्सूल नहीं होते हैं।

अधिकांश साल्मोनेला अलगमोबाइल (पेरिट्रिचस), लेकिन स्थिर म्यूटेंट और सेरोवर हैं। केमोऑर्गनोट्रोफ़्स, ऑक्सीडेज-नेगेटिव, कैटेलेज-पॉजिटिव।

तापमान इष्टतम साल्मोनेला 35-37 डिग्री सेल्सियस है, इष्टतम पीएच 7.2-7.4 है। साल्मोनेला की वृद्धिसोडियम क्लोराइड और चीनी की उच्च सांद्रता को दबाना या सीमित करना। पोषक माध्यम पर, साल्मोनेला छोटी (2-4 मिमी) पारदर्शी एस-कालोनियों का निर्माण करती है जो अधिकांश एंटरोबैक्टीरिया की विशिष्ट होती हैं। वे खुरदरी और सूखी आर-कालोनियां भी बनाते हैं। एंडो अगर पर, एस-कालोनियां गुलाबी और पारदर्शी होती हैं, प्ल्बस्किरेव अगर पर वे रंगहीन होती हैं और अधिक घने और बादलदार दिखती हैं, बिस्मथ-सल्फाइट अगर पर वे काले-भूरे रंग की होती हैं, एक धातु की चमक के साथ, एक काले प्रभामंडल से घिरा होता है, नीचे का माध्यम कॉलोनियां काली हो जाती हैं। अपवाद एस। पैराटाइफी ए, एस। कोलेरासुइस और कुछ अन्य हैं, जो बिस्मथ-सल्फाइट अगर (चित्र 25, रंग डालने देखें) पर भूरे-हरे रंग की कॉलोनियां बनाते हैं। शोरबा पर, एस-रूप माध्यम की एक समान मैलापन देते हैं; आर-रूप - तलछट।

साल्मोनेला के जैव रासायनिक लक्षण

साल्मोनेला के जैव रासायनिक लक्षणनीचे दी गई तालिका में प्रस्तुत किए गए हैं। साल्मोनेला की विशेषता गुण एच 2 एस का गठन और इंडोल गठन की अनुपस्थिति (कुछ सेरोवर को छोड़कर) हैं।

मांस-पेप्टोन शोरबा में 3-4% अगर जोड़ा जाता है, पीएच को 7.6 तक समायोजित किया जाता है, 100 मिलीलीटर फ्लास्क में डाला जाता है और हमेशा की तरह, एक आटोक्लेव में निष्फल किया जाता है, इस रूप में तब तक रखा जाता है जब तक कि फुकसिन-सल्फाइट अगर तैयार न हो जाए। उपयोग के दिन फुकसिन सल्फाइट अगर तैयार करें। भविष्य के लिए तैयार करना और इस माध्यम को स्टोर करना असंभव है, क्योंकि यह जल्दी से लाल हो जाता है।

100 मिलीलीटर पिघला हुआ और 70 डिग्री सेल्सियस 3-4% मांस-पेप्टोन अगर तक ठंडा करने के लिए, 1 ग्राम लैक्टोज को बाँझ रूप से जोड़ा जाता है, पहले इसे भंग कर 5 मिलीलीटर बाँझ पानी में उबाला जाता है। इसके अलावा, बुनियादी फुकसिन के फ़िल्टर्ड संतृप्त अल्कोहल समाधान के 0.5 मिलीलीटर और ताजा तैयार 10% सोडियम सल्फेट समाधान के 2.5 मिलीलीटर भी यहां जोड़े जाते हैं। सोडियम सल्फाइट (Na2SO3) 0.5 ग्राम की मात्रा में 5 मिलीलीटर पानी में घोलकर उपयोग से पहले उबालकर निष्फल कर दिया जाता है।

आप इसे थोड़ा अलग तरीके से कर सकते हैं। फुकसिन और सोडियम सल्फाइट को पहले एक परखनली में मिलाया जाता है: सोडियम सल्फाइट के घोल को 0.5 मिली फुकसिन के घोल में मिलाते हुए तब तक मिलाया जाता है जब तक कि परखनली में तरल रंगहीन या थोड़ा गुलाबी न हो जाए। और इस मिश्रण को पिघले हुए और थोड़े ठंडे आगर में डाल दिया जाता है। माध्यम के साथ फ्लास्क को अच्छी तरह मिलाने के लिए हिलाया जाता है और माध्यम को पेट्री डिश में डाला जाता है। माध्यम के जमने के बाद, इसे थर्मोस्टेट में 37 डिग्री सेल्सियस पर 30 मिनट के लिए सुखाया जाता है।

गर्म होने पर, माध्यम थोड़ा गुलाबी रंग का होना चाहिए, और ठंडा होने के बाद पूरी तरह से रंगहीन होना चाहिए। एंडो के वातावरण में फुकसिन का मलिनकिरण पेश किए गए सोडियम सल्फाइट के कारण होता है।

सीमन्स बुधवार

कोलाई समूह के रोगाणुओं की पहचान करते समय (मिट्टी की प्रजातियों एस्चेरिचिया कोलाई एरोजेन्स को फेकल प्रजाति एस्चेरिचिया कोली कम्यून से अलग करने के लिए), सीमन्स साइट्रेट माध्यम का उपयोग किया जाता है। 1 लीटर आसुत जल में, 1.5 ग्राम सोडियम फॉस्फेट (या मोनोसबस्टिट्यूटेड अमोनियम फॉस्फेट), 1 ग्राम मोनोसबस्टिट्यूटेड पोटेशियम फॉस्फेट (KH2PO4), 0.2 ग्राम मैग्नीशियम सल्फेट, 2.5-3 ग्राम क्रिस्टलीय सोडियम साइट्रेट, पीएच 7.0 -7.2 सेट करें। , 2% अगर डालें और, माध्यम को पिघलाने के बाद, इसे 100 मिलीलीटर फ्लास्क में डालें। 120 डिग्री सेल्सियस पर 15 मिनट के लिए एक आटोक्लेव में जीवाणुरहित करें।

उपयोग करने से पहले एक संकेतक को माध्यम में जोड़ा जाना चाहिए। ब्रोमथिमोल ब्लू या फिनोलोट का उपयोग किया जा सकता है। संकेतक को पिघला हुआ माध्यम के 100 मिलीलीटर में जोड़ा जाता है। Bromothymolblau को अल्कोहल 1.5% घोल के 1 मिली की मात्रा में लिया जाता है। माध्यम जैतून हरा हो जाता है। 1.5% अल्कोहल समाधान के 2 मिलीलीटर की मात्रा में फेनोलरोट मिलाया जाता है। माध्यम पीला हो जाता है। संकेतक जोड़ने के बाद, माध्यम को टेस्ट ट्यूब में डाला जाता है और एक आटोक्लेव में 120 डिग्री सेल्सियस पर 15 मिनट के लिए निष्फल कर दिया जाता है।

कार्बोहाइड्रेट की मोटली श्रृंखला, या हिस का पर्यावरण

जीस मीडिया का उपयोग सूक्ष्मजीवों की एंजाइमी क्षमता को निर्धारित करने के लिए किया जाता है। माइक्रोबियल सेल में एक या दूसरे एंजाइम की उपस्थिति के आधार पर, यह कुछ अपघटन उत्पादों के निर्माण के साथ किसी एक कार्बोहाइड्रेट को विघटित करने में सक्षम होता है, इसलिए, किसी भी कार्बोहाइड्रेट को माध्यम में पेश किया जाता है: लैक्टोज, ग्लूकोज, मैनिटोल, सुक्रोज, आदि। ऐसे मीडिया के एक सेट को "कार्बोहाइड्रेट की भिन्न श्रृंखला" का नाम मिला।

सबसे पहले, पेप्टोन पानी तैयार किया जाता है: पेप्टोन के 10 ग्राम और रासायनिक रूप से शुद्ध टेबल नमक के 5 ग्राम को 1 लीटर आसुत जल के लिए लिया जाता है, पेप्टोन के घुलने तक उबाला जाता है, एक पेपर फिल्टर के माध्यम से फ़िल्टर किया जाता है (निस्पंद पूरी तरह से पारदर्शी होना चाहिए) और पीएच सेट करें 7.2-7.4। फिर, इस्तेमाल किए गए कार्बोहाइड्रेट में से 0.5 ग्राम और एंड्रीड इंडिकेटर के 1 मिलीलीटर को 100 मिलीलीटर पेप्टोन पानी में मिलाया जाता है।

आंद्रेडे संकेतक की संरचना में शामिल हैं: 0.5 ग्राम एसिड फुकसिन, 16 मिलीलीटर 1 एन। सोडियम हाइड्रॉक्साइड घोल (NaOH) और 100 मिली आसुत जल। यदि आवश्यक हो, तो संकेतक को पहले से तैयार किया जा सकता है और 15 मिनट के लिए 100 डिग्री सेल्सियस पर उबालने के बाद एक अंधेरी जगह में संग्रहीत किया जा सकता है। संकेतक की शुरूआत के बाद, मीडिया को फ्लोट के साथ टेस्ट ट्यूब में डाला जाता है और कोच बॉयलर में 30 मिनट के लिए तीन बार निष्फल किया जाता है। नसबंदी के अंत में, फ्लोट को माध्यम में डुबो देना चाहिए, अन्यथा ट्यूब का उपयोग नहीं किया जा सकता है। एंड्रीड के अभिकर्मक के साथ हिस मीडिया गुलाबी रंग के बिना भूसे-पीले रंग के होते हैं। पर्यावरण में सूक्ष्मजीवों के विकास के साथ, बाद वाले, एसिड के निर्माण के साथ चीनी को विघटित करते हुए, प्रतिक्रिया में बदलाव का कारण बनते हैं। और चूंकि आंद्रेई संकेतक अम्लीय वातावरण में लाल हो जाता है, यह इस बात का प्रमाण है कि सूक्ष्मजीव इस चीनी का उपयोग अपने जीवन के लिए करते हैं। लाली की अनुपस्थिति, इसके विपरीत, एक एंजाइम के अध्ययन किए गए सूक्ष्म जीव के एंजाइमेटिक कॉम्प्लेक्स में अनुपस्थिति को इंगित करता है जो माध्यम में मौजूद कार्बोहाइड्रेट को विघटित करता है।

सूक्ष्मजीवों की एंजाइमेटिक गतिविधि समृद्ध और विविध है। यह आपको प्रजातियों को स्थापित करने और संबद्धता टाइप करने की अनुमति देता है, सूक्ष्म जीव के जैविक रूपों का निर्धारण करता है। ऐसे कई एंजाइम हैं जिनकी गतिविधि एक सूक्ष्मजीव की रोगजनकता की डिग्री निर्धारित कर सकती है।

रोगाणुओं की एंजाइमेटिक (जैव रासायनिक) गतिविधि को निर्धारित करने के लिए, विभेदक निदान मीडिया का उपयोग किया जाता है।

विभेदक-नैदानिक ​​​​मीडिया में गिस मीडिया शामिल है, जिस पर सूक्ष्मजीवों की saccharolytic गतिविधि का अध्ययन किया जाता है।

हिस मीडिया तरल या ठोस हो सकता है। गिस मीडिया का आधार मांस - पेप्टोन शोरबा (एमपीबी) और मांस - पेप्टोन अगर (एमपीए) है। इन मीडिया में एक कार्बोहाइड्रेट और एक संकेतक शामिल हैं। गीस मीडिया की दो श्रृंखलाएं हैं - बड़ी (27 वस्तुओं सहित) और छोटी। हिस मीडिया की एक छोटी श्रृंखला में माल्टोस, ग्लूकोज, सुक्रोज, ल्यूर और लैक्टोज शामिल हैं। माध्यम की प्रारंभिक पीएच सेटिंग थोड़ी क्षारीय (7.2 - 7.4) है।

यदि, रोगाणुओं की खेती के दौरान, सब्सट्रेट को एसिड में तोड़ दिया जाता है, तो माध्यम का पीएच एसिड पक्ष में बदल जाता है और साथ ही, संकेतक का रंग बदल जाता है। पोषक माध्यम के रंग में परिवर्तन किसी दिए गए सूक्ष्म जीव में एक एंजाइम की उपस्थिति का एक संकेतक है जो एक विशिष्ट सब्सट्रेट को एसिड में तोड़ देता है। एक तरल और घने पोषक माध्यम दोनों में, एक एंजाइम की उपस्थिति जो सब्सट्रेट को एसिड में तोड़ देती है, संकेतक के रंग में बदलाव से आंकी जाती है।

गैस का निर्माण अगर की मोटाई में गैस के बुलबुले के संचय और अगर के टूटने से (यदि उसका मीडिया घना है) या फ्लोट में गैस के बुलबुले के संचय से निर्धारित होता है (यदि मीडिया तरल है) . फ्लोट एक संकीर्ण कांच की ट्यूब होती है जिसका एक सीलबंद सिरा ऊपर की ओर होता है, जिसे माध्यम के निष्फल होने से पहले एक माध्यम के साथ एक परखनली में रखा जाता है।

एंजाइमों के सेट में अंतर जो कार्बोहाइड्रेट को तोड़ते हैं, संबंधित रोगाणुओं के भेदभाव में इस्तेमाल किया जा सकता है, उदाहरण के लिए, साल्मोनेला, शिगेला, एस्चेरिचिया। तो, एंडो, लेविन, प्लॉस्किरेव मीडिया पर, जिसमें लैक्टोज और एक संकेतक (एनिलिन डाई) शामिल हैं, एस्चेरिचिया कोलाई कॉलोनियों का रंग बैंगनी (लेविन मीडिया पर) या बकाइन (एंडो और प्लॉस्किरेव मीडिया पर) होगा। एक ही मीडिया पर साल्मोनेला और शिगेला की कॉलोनियां रंगहीन होंगी।

यह इस तथ्य के कारण है कि एस्चेरिचिया कोलाई, एंजाइम लैक्टेज होने के कारण, लैक्टोज को तोड़ देता है, जिसके परिणामस्वरूप एसिड का निर्माण होता है, माध्यम का पीएच एसिड की तरफ शिफ्ट हो जाता है और संकेतक का रंग, एनिलिन डाई दिखाई देता है। कोलाई नमूने एनिलिन डाई के साथ अच्छी तरह से दागते हैं, और दाग वाले व्यक्तियों का संग्रह एक दाग वाली कॉलोनी का प्रतिनिधित्व करता है।

शिगेला और साल्मोनेला में एंजाइम लैक्टेज नहीं होता है और लैक्टोज को तोड़ता नहीं है, माध्यम का पीएच नहीं बदलता है, संकेतक प्रकट नहीं होता है, माइक्रोबियल कोशिकाएं दाग नहीं करती हैं। इसलिए, एंडो और प्लॉस्किरेव मीडिया पर साल्मोनेला और शिगेला कॉलोनियां रंगहीन होंगी।

एन्जाइम एमाइलेज की उपस्थिति का अंदाजा स्टार्च वाले माध्यम पर कल्चर की बुवाई से लगाया जा सकता है। यदि कोई एंजाइम है जो स्टार्च को तोड़ता है, तो जब परखनली में लुगोल के घोल की एक बूंद डाली जाती है, तो माध्यम नीला नहीं होगा। अपघटित स्टार्च, जब लुगोल के घोल के साथ मिलाया जाता है, तो नीला रंग देता है।

प्रोटियोलिटिक गुणों (यानी, प्रोटीन, पॉलीपेप्टाइड्स, आदि को तोड़ने की क्षमता) का अध्ययन जिलेटिन, दूध, मट्ठा, पेप्टोन के साथ मीडिया पर किया जाता है। जिलेटिन माध्यम पर जिलेटिन-किण्वन रोगाणुओं की वृद्धि के साथ, माध्यम द्रवीभूत होता है। विभिन्न रोगाणुओं के कारण होने वाले द्रवीकरण की प्रकृति भिन्न होती है।

पेप्टोन, इंडोल, स्काटोल, हाइड्रोजन सल्फाइड, अमोनिया के साथ विभाजित होने पर अमोनिया जारी किया जा सकता है। उनका गठन संकेतकों की मदद से स्थापित किया गया है। उदाहरण के लिए, फिल्टर पेपर को एक संकेतक समाधान के साथ पूर्व-गर्भवती किया जाता है, सुखाया जाता है, 5-6 सेंटीमीटर लंबी संकीर्ण स्ट्रिप्स में काटा जाता है, और बीसीएच पर कल्चर बोने के बाद, कॉर्क के नीचे (कॉर्क और टेस्ट ट्यूब की दीवार के बीच) रखा जाता है। थर्मोस्टैट में ऊष्मायन के बाद, मैं परिणाम को ध्यान में रखता हूं। अमोनिया के कारण लिटमस पत्र नीला हो जाता है; जब हाइड्रोजन सल्फाइड को लेड एसीटेट और सोडियम बाइकार्बोनेट के 20% घोल में भिगोकर कागज के एक टुकड़े पर छोड़ा जाता है, तो लेड सल्फेट बनता है - एक काला नमक, और संकेतक पेपर काला हो जाता है। इंडोल ऑक्सालिक एसिड के घोल में भिगोए गए कागज के टुकड़े की लालिमा में योगदान देता है।

रक्त अगर का उपयोग करके रोगाणुओं के हेमोलिटिक गुणों का पता लगाया जा सकता है। यदि सूक्ष्म जीव में एंजाइम हेमोलिसिन है, तो इस सूक्ष्म जीव की कॉलोनियों के आसपास एरिथ्रोसाइट लसीका के क्षेत्र होंगे (इन क्षेत्रों में, अगर रंगहीन होगा)।

जर्दी-नमक अगर पर संस्कृति के टीकाकरण द्वारा एंजाइम लेसिथिनेज का पता लगाया जाता है। सूक्ष्म जीव की कॉलोनी के चारों ओर एक मैट प्रभामंडल बनता है जो इस एंजाइम का उत्पादन करता है।

यह याद रखना चाहिए कि विभिन्न एंजाइमों की उपस्थिति रोगाणुओं के जैव रासायनिक गुणों को निर्धारित करती है।

खाद्य विषाक्तता के प्रेरक एजेंटों के सांस्कृतिक और जैव रासायनिक गुण

किसी भी सूक्ष्मजीव की एंजाइम संरचना सामान्य परिस्थितियों में काफी स्थिर विशेषता होती है, अर्थात। विभिन्न प्रकार के सूक्ष्मजीव एंजाइमों के समूह में भिन्न होते हैं।

विभिन्न सूक्ष्मजीवों के विभेदन और पहचान के लिए एंजाइम संरचना का अध्ययन महत्वपूर्ण है।

बैक्टीरिया के लिए विशेष धुंधला तरीके।ग्राम और ज़ीहल-नीलसन विधियों ने सबसे बड़ा वितरण पाया है।

विभेदक तरीकेआमतौर पर विभिन्न रूपात्मक संरचनाओं को धुंधला करने के लिए उपयोग किया जाता है।

कैप्सूल।हिस, लीफसन और एंथोनी के तरीकों का उपयोग जीवाणु कैप्सूल को धुंधला करने के लिए किया जाता है; बाद की विधि सबसे सरल है और इसमें क्रिस्टल वायलेट के साथ धुंधलापन शामिल है और इसके बाद 20% जलीय CuSO4 के साथ उपचार किया जाता है।

फ्लैगेला।फ्लैगेला को धुंधला करने के लिए लोफ़लर, बेली, ग्रे और अन्य के तरीकों का प्रस्ताव किया गया है। इन विधियों को तैयारी की प्रारंभिक नक़्क़ाशी और बाद में धुंधला (अधिक बार, ज़ीहल के कार्बोलिक फ्यूचिन) की विशेषता है।

विवाद।बैक्टीरियल बीजाणुओं को उनकी दीवारों के प्रारंभिक उपचार के बाद दाग दिया जाता है। पेशकोव की विधि सबसे सरल है, जिसमें एक कांच की स्लाइड पर लोफ्लर के नीले रंग के साथ एक धुंध उबालना शामिल है, इसके बाद तटस्थ लाल रंग से धुंधला हो जाना शामिल है। बीजाणु नीले, वानस्पतिक कोशिकाओं को गुलाबी रंग में रंगते हैं।

संस्कृति के तरीके

जीवाणुओं को उगाते समय, स्थिर विधि, वातन के साथ गहरी खेती की विधि और पोषक माध्यम प्रवाहित करने की विधि का उपयोग किया जाता है। खेती के तरीकों के अनुसार, जीवाणु संस्कृतियों को आवधिक (स्थिर और गहरी खेती के साथ) और निरंतर (प्रवाह खेती के साथ) में विभाजित किया जाता है।

स्थिर विधिव्यवहार में सबसे अधिक प्रयोग किया जाता है। मीडिया की संरचना स्थिर रहती है, उनके साथ कोई अतिरिक्त हेरफेर नहीं किया जाता है।

गहरी संस्कृति विधिजीवाणु बायोमास की औद्योगिक खेती में उपयोग किया जाता है, जिसके लिए विशेष बॉयलर-रिएक्टर का उपयोग किया जाता है। वे तापमान बनाए रखने, शोरबा को विभिन्न पोषक तत्वों की आपूर्ति करने, बायोमास को मिलाने और लगातार ऑक्सीजन की आपूर्ति करने के लिए प्रणालियों से लैस हैं। माध्यम की पूरी मोटाई में एरोबिक स्थितियों का निर्माण एरोबिक मार्ग के साथ ऊर्जा प्रक्रियाओं के प्रवाह में योगदान देता है, जो ग्लूकोज की ऊर्जा क्षमता के अधिकतम उपयोग में योगदान देता है और, परिणामस्वरूप, अधिकतम बायोमास उपज।

प्रवाह मीडिया विधि(औद्योगिक खेती विधि) आपको घातीय वृद्धि चरण में जीवाणु संस्कृति को लगातार बनाए रखने की अनुमति देता है, जो पोषक तत्वों के निरंतर परिचय और एक निश्चित संख्या में जीवाणु कोशिकाओं को हटाने से प्राप्त होता है। घातीय वृद्धि के चरण में बैक्टीरिया की उपस्थिति विभिन्न जैविक रूप से सक्रिय पदार्थों (विटामिन, एंटीबायोटिक्स, आदि) की अधिकतम उपज सुनिश्चित करती है।

बैक्टीरिया की प्राथमिक पहचान

ज्यादातर मामलों में, रोगजनकों की प्राथमिक पहचान के लिए विकास विशेषताओं का अध्ययन उन कॉलोनियों पर किया जाता है जो 18-24 घंटों के भीतर बढ़ी हैं। विभिन्न माध्यमों पर बैक्टीरिया के विकास की प्रकृति बहुत उपयोगी जानकारी प्रदान कर सकती है। व्यवहार में, मानदंड के अपेक्षाकृत छोटे सेट का उपयोग किया जाता है। तरल मीडिया में, सतह की प्रकृति (फिल्म निर्माण) या निकट-नीचे की वृद्धि (तलछट का प्रकार) और माध्यम की सामान्य मैलापन को आमतौर पर ध्यान में रखा जाता है। बैक्टीरिया ठोस माध्यम पर उपनिवेश बनाते हैं, यानी बैक्टीरिया के विकास और संचय के परिणामस्वरूप पृथक संरचनाएं। कॉलोनियां एक या एक से अधिक कोशिकाओं की वृद्धि और प्रजनन के परिणामस्वरूप उत्पन्न होती हैं। इस प्रकार, कॉलोनी से फिर से बोने से रोगज़नक़ की शुद्ध संस्कृति के साथ काम करना संभव हो जाता है। घने मीडिया पर बैक्टीरिया की वृद्धि में अधिक विशिष्ट विशेषताएं हैं।

कुछ जीवाणु स्रावित करते हैं हेमोलिसिन- पदार्थ जो लाल रक्त कोशिकाओं को नष्ट करते हैं। अंतरिक्ष यान पर, उनकी कॉलोनियां समाशोधन क्षेत्रों से घिरी हुई हैं। हेमोलिसिन का गठन (और, तदनुसार, हेमोलिसिस ज़ोन का आकार) परिवर्तनशील हो सकता है, और हेमोलिटिक गतिविधि के पर्याप्त निर्धारण के लिए, संस्कृतियों वाले व्यंजनों को एक प्रकाश स्रोत (छवि 1) के खिलाफ देखा जाना चाहिए। 1-14). हेमोलिसिन की गतिविधि लाल रक्त कोशिकाओं के पूर्ण या अपूर्ण विनाश में प्रकट हो सकती है।

α-हेमोलिसिस।सेलुलर स्ट्रोमा के संरक्षण के साथ, एरिथ्रोसाइट्स का विनाश अधूरा हो सकता है। इस घटना को α-hemolysis कहा जाता है। उपनिवेशों के आसपास के वातावरण का ज्ञान आमतौर पर नगण्य होता है, बाद में उपनिवेशों के आसपास का वातावरण हरा रंग प्राप्त कर सकता है।

बैक्टीरियोलॉजिकल अभ्यास में, saccharolytic और proteolytic एंजाइमों का सबसे अधिक बार अध्ययन किया जाता है।

इस तरह की वृद्धि न्यूमोकोकस के साथ-साथ तथाकथित हरी स्ट्रेप्टोकोकी के समूह के लिए विशिष्ट है।

β-हेमोलिसिस।बैक्टीरिया का एक बहुत बड़ा समूह लाल रक्त कोशिकाओं, या β-हेमोलिसिस के पूर्ण विनाश का कारण बनता है। उनकी कॉलोनियां विभिन्न आकारों के पारदर्शी क्षेत्रों से घिरी हुई हैं। उदाहरण के लिए, स्ट्रेप्टोकोकस प्योगेनेसतथा स्टेफिलोकोकस ऑरियसहेमोलिसिस के बड़े क्षेत्र बनाते हैं, ए लिस्टेरिया monocytogenesया स्ट्रेप्टोकोकस एग्लैक्टिया- छोटे, फैलाना क्षेत्र। हेमोलिटिक गतिविधि निर्धारित करने के लिए, चॉकलेट अगर (एसए) का उपयोग नहीं किया जाना चाहिए, क्योंकि α- या β-हेमोलिसिस के परिणामी क्षेत्रों में विशिष्ट विशेषताएं नहीं होती हैं और माध्यम की समान हरियाली का कारण बनती हैं।

उपनिवेशों का आकार और आकार

उपनिवेशों की महत्वपूर्ण विशेषताएं उनके आकार और आकार हैं। कॉलोनियां बड़ी या छोटी हो सकती हैं। उपनिवेशों का आकार एक विशेषता है जो विभिन्न प्रजातियों, प्रजातियों और यहां तक ​​कि बैक्टीरिया के प्रकारों के बीच अंतर करना संभव बनाता है।

ज्यादातर मामलों में, ग्राम-पॉजिटिव बैक्टीरियल कॉलोनियां ग्राम-नेगेटिव बैक्टीरियल कॉलोनियों से छोटी होती हैं। बैक्टीरिया की कॉलोनियां चपटी, उभरी हुई, उत्तल हो सकती हैं, उनका केंद्र दब गया या उठा हुआ हो सकता है। एक अन्य महत्वपूर्ण विशेषता कालोनियों के किनारों का आकार है। उपनिवेशों के आकार का अध्ययन करते समय, इसकी सतह की प्रकृति को ध्यान में रखा जाता है: मैट, चमकदार, चिकनी या खुरदरी। कॉलोनियों के किनारे चिकने, लहरदार, लोबुलेटेड (गहरा इंडेंटेड), दाँतेदार, कटा हुआ, झालरदार आदि हो सकते हैं। कॉलोनियों का आकार और आकार अक्सर बदल सकता है। ऐसे परिवर्तनों को पृथक्करण के रूप में जाना जाता है। अक्सर एस - और आर - ड्यूक एसोसिएशन मिलते हैं। एस-कालोनियां गोल, चिकनी और उत्तल होती हैं, जिनमें चिकने किनारे और चमकदार सतह होती है। आर-कालोनियां - अनियमित आकार की, खुरदरी, दांतेदार किनारों वाली।

कॉलोनी का रंग

फसलों को देखते समय कालोनियों के रंग पर भी ध्यान दें। अधिक बार वे रंगहीन, सफेद, नीले, पीले या बेज रंग के होते हैं; कम बार - लाल, बैंगनी, हरा या काला। कभी-कभी उपनिवेश इंद्रधनुषी होते हैं, अर्थात् इंद्रधनुष के सभी रंगों से झिलमिलाते हैं। रंगद्रव्य बनाने के लिए बैक्टीरिया की क्षमता के परिणामस्वरूप धुंधलापन होता है। विशेष सामग्री या रंगों वाले विशेष विभेदक मीडिया पर, रंग शामिल करने या रंगहीन रूप से उनकी वसूली के कारण उपनिवेश विभिन्न प्रकार के रंग (काला, नीला, आदि) प्राप्त कर सकते हैं। इस मामले में, उनका रंग किसी भी रंगद्रव्य के गठन से जुड़ा नहीं है।

कालोनियों की संगति और माध्यम पर विकास की विशेषताएं

कालोनियों की संगति और माध्यम पर विकास की विशेषताओं से उपयोगी जानकारी दी जा सकती है। आमतौर पर यह जानकारी कॉलोनियों को लूप से छूकर प्राप्त की जा सकती है। कालोनियों को माध्यम से आसानी से हटाया जा सकता है, इसमें विकसित हो सकते हैं या इसके क्षरण का कारण बन सकते हैं (दरारें और धक्कों का निर्माण)। कॉलोनियों की संगति कठोर या नरम हो सकती है। नरम कॉलोनियां- तैलीय या मलाईदार; घिनौना (लूप से चिपके) या कम (लूप के पीछे खिंचाव) हो सकता है।

कठिन कॉलोनियां- सूखा, मोमी, रेशेदार या टेढ़ा-मेढ़ा; लूप से छूने पर भंगुर और टूट सकता है।

गंध उपनिवेशों का एक कम महत्वपूर्ण संकेत है, क्योंकि इससे जुड़े संघ व्यक्तिपरक हैं। विशेष रूप से, स्यूडोमोनास एरुगिनोसा की संस्कृतियों में कारमेल की गंध होती है, लिस्टेरिया की संस्कृतियां - मट्ठा, प्रोटीस - एक पुटीय गंध, नोकार्डिया - ताजा खोदी गई पृथ्वी।

जीवाणुओं की पहचान के लिए जैव रासायनिक तरीके

जीवाणु चयापचय की विशेषताओं की पहचान करने के लिए बहुत सी विधियों का उपयोग किया जाता है, लेकिन व्यवहार में उनमें से बहुत कम संख्या में उपयोग किया जाता है। अधिकांश विधियाँ विभेदक निदान वातावरण के उपयोग पर आधारित हैं जिसमें विभिन्न संकेतक शामिल हैं।

कार्बोहाइड्रेट को किण्वित करने की क्षमता

कार्बनिक अम्लों के निर्माण (तदनुसार, पीएच में कमी होती है) के कारण माध्यम के रंग को बदलकर कार्बोहाइड्रेट को किण्वित करने की क्षमता का मूल्यांकन किया जाता है, जिससे संकेतक के रंग में परिवर्तन होता है।

"मोटली" पंक्ति।हिस मीडिया का उपयोग saccharolytic गतिविधि को निर्धारित करने के लिए किया जाता है; उनमें 1% पेप्टोन पानी (या एमपीबी), एक एंड्रेड संकेतक और कार्बोहाइड्रेट में से एक शामिल है। जब कार्बोहाइड्रेट को साफ किया जाता है, तो माध्यम का रंग पीले से लाल रंग में बदल जाता है। चूंकि बैक्टीरिया कुछ कार्बोहाइड्रेट को किण्वित करने की उनकी क्षमता से अलग होते हैं, इसलिए टेस्ट ट्यूब की पंक्तियाँ एक प्रेरक रूप लेती हैं। इसलिए, वातावरण के इस सेट को "भिन्न" (या रंगीन) श्रृंखला कहा जाता है।

कांच तैरता है।एसिड और गैस के निर्माण के साथ कार्बोहाइड्रेट को किण्वित करने के लिए सूक्ष्मजीवों की क्षमता का निर्धारण करने के लिए, ग्लास फ्लोट्स (एक छोर पर सील की गई छोटी ट्यूब) को मीडिया वाले जहाजों में पेश किया जाता है, जो उन्हें गैस से भरने के बाद तैरते हैं।

प्रोटीन टूटना

कुछ बैक्टीरिया प्रोटीज को स्रावित करके प्रोटीयोलाइटिक गतिविधि प्रदर्शित करते हैं जो प्रोटीन के टूटने को उत्प्रेरित करते हैं। कोलेजनैस के समूह से प्रोटीयोलाइटिक एंजाइम की उपस्थिति एनआरएम में एक इंजेक्शन के साथ टीकाकरण द्वारा निर्धारित की जाती है। सकारात्मक परिणाम के साथ, इसका द्रवीकरण फ़नल के रूप में या ऊपर से नीचे की परतों में देखा जाता है। माध्यम के रंग को बदलकर प्रोटीन और अमीनो एसिड को साफ करने की क्षमता का भी आकलन किया जा सकता है, क्योंकि परिणामी उत्पाद - अमोनिया, इंडोल और हाइड्रोजन सल्फाइड - पीएच को क्षारीय पक्ष में स्थानांतरित करते हैं, जिससे संकेतक के रंग में बदलाव होता है।

अमोनिया का गठन। NH3 बनाने की क्षमता निर्धारित करने के लिए BCH में बुवाई की जाती है, और इसकी सतह और कॉर्क के बीच लिटमस पेपर की एक पट्टी तय की जाती है। परएक सकारात्मक परिणाम कागज को नीला कर देता है।

इंडोल और H2S का निर्माण।आम तौर पर, इंडोल और हाइड्रोजन सल्फाइड बनाने की क्षमता निर्धारित करने के लिए, बीसीएच में बुवाई भी की जाती है, इसकी सतह और कॉर्क के बीच कागजात तय किए जाते हैं: पहले मामले में, ऑक्सालिक एसिड के समाधान के साथ गर्भवती (जब इंडोल बनता है, कागज लाल हो जाता है), दूसरे में - लेड एसीटेट के घोल के साथ (जब एच 2 एस बनता है)। कागज काला हो जाता है। इसके अलावा, संकेतक युक्त विशेष मीडिया का उपयोग किया जाता है (उदाहरण के लिए, क्लिगलर का माध्यम), या वे हैं दृश्यमान जीवाणु वृद्धि के पंजीकरण के बाद सीधे माध्यम में जोड़ा जाता है।

नाइट्रेट रिडक्टेस गतिविधि के लिए परीक्षण

इस परीक्षण का उपयोग अलग-अलग प्रकार के जीवाणुओं की पहचान करने के लिए किया जाता है। यह आपको नाइट्रेट को नाइट्राइट में बहाल करने की क्षमता निर्धारित करने की अनुमति देता है। NO3 से NO2 को कम करने की क्षमता BCH में 1% KNO3 घोल युक्त संवर्धन द्वारा निर्धारित की जाती है। नाइट्राइट का निर्धारण करने के लिए, माध्यम में ग्रिस अभिकर्मक की कुछ बूंदें डालें। एक सकारात्मक परिणाम के साथ, एक लाल अंगूठी की उपस्थिति देखी जाती है।

क्रोमैटोग्राफी

क्रोमैटोग्राफिक विधियों का उपयोग बैक्टीरिया की पहचान करने और उनकी व्यवस्थित स्थिति स्थापित करने के लिए किया जाता है। अनुसंधान के लिए वस्तुएँ कोशिका भित्ति के फैटी एसिड, अद्वितीय मध्यवर्ती और बैक्टीरिया की महत्वपूर्ण गतिविधि के अंतिम मेटाबोलाइट्स हैं। क्रोमैटोग्राफिक सिस्टम आमतौर पर कंप्यूटर से जुड़े होते हैं, जो परिणामों के लेखांकन को बहुत सरल करता है। शॉर्ट-चेन फैटी एसिड और टेकोइक एसिड की सबसे आम पहचान गैस-तरल क्रोमैटोग्राफी है। उच्च दाब तरल क्रोमैटोग्राफी माइकोबैक्टीरिया की कोशिका भित्ति में माइकोलिक एसिड की पहचान करती है। पतली परत क्रोमैटोग्राफी का उपयोग जीवाणु कोशिका की दीवार के आइसोप्रेनॉइड क्विनोन की पहचान करने के लिए किया जाता है। विभिन्न प्रजातियों में, उनकी सामग्री और सेट भिन्न होते हैं, लेकिन स्थिर होते हैं, जिससे प्रत्येक विशिष्ट प्रजाति की व्यवस्थित स्थिति स्थापित करना संभव हो जाता है।

संकेतक कागजात

जीवाणुओं की जैव रासायनिक गतिविधि का अध्ययन करने के लिए, संकेतक पेपर या मल्टीमाइक्रोटेस्ट के सेट के सिस्टम का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है।

संकेतक पत्रों की प्रणाली (एसआईबी)- विभिन्न सबस्ट्रेट्स के साथ लगाए गए डिस्क का एक सेट। उन्हें बैक्टीरिया के निलंबन के साथ सीधे टेस्ट ट्यूब में पेश किया जा सकता है या पहले प्लास्टिक की प्लेटों के कुओं में रखा जा सकता है, जहां अध्ययन किए गए बैक्टीरिया को पेश किया जाएगा। तो, व्यवहार में, मिनिटेक किट का उपयोग किया जाता है Enterobacteriaceaeऔर मिनीटेक नेइसेरियाएंटरोबैक्टीरिया (चौदह सब्सट्रेट) और नीसेरिया (चार सब्सट्रेट) के विभेदक निदान के लिए, ऊष्मायन के 4 घंटे के बाद परिणाम प्राप्त करने की अनुमति देता है 37 डिग्री सेल्सियस

मल्टीमाइक्रो टेस्ट सूट- प्लास्टिक की प्लेटें, जिनके कुओं में विभिन्न सब्सट्रेट और संकेतक रखे जाते हैं। बैक्टीरिया के विभिन्न तनुकरणों को कुओं में जोड़ा जाता है और 37 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट किया जाता है। व्यवहार में, रैपिड एनएच परीक्षणों का उपयोग निसेरिया और हीमोफिलस, एंटरोबैक्टीरिया के लिए रैपिड ई आदि की पहचान करने के लिए किया जाता है, जिससे आप 4-8 घंटों के बाद परिणाम प्राप्त कर सकते हैं।

स्वचालित बैक्टीरिया पहचान प्रणाली

स्वचालित जीवाणु पहचान प्रणाली आपको रोगज़नक़ के प्रकार और रोगाणुरोधी दवाओं के प्रति संवेदनशीलता के बारे में जानकारी प्राप्त करने के लिए जल्दी (पारंपरिक तरीकों से 24-48 घंटे तेज) की अनुमति देती है। वर्तमान में, माइक्रोस्कैन और विटेक प्रकार के सिस्टम सबसे व्यापक रूप से उपयोग किए जाते हैं।

माइक्रोस्कोप सिस्टम।जीवाणुओं की पहचान के लिए टर्बिडीमेट्रिक, वर्णमिति और फ्लोरोसेंट विधियों का प्रयोग करें। सिस्टम में विभिन्न सबस्ट्रेट्स वाले प्लास्टिक प्लेटों के सेट होते हैं। फ्लोरोसेंट सब्सट्रेट (विश्लेषण समय - 2 घंटे) का उपयोग करके ग्राम-पॉजिटिव और ग्राम-नेगेटिव बैक्टीरिया को विभेदित किया जाता है। हीमोफाइल, एनारोबेस और यीस्ट की पहचान करने के लिए, उनके रंग बदलने वाले क्रोमोजेनिक सब्सट्रेट का उपयोग किया जाता है (विश्लेषण का समय 4-6 घंटे है)। विभिन्न एंटीबायोटिक दवाओं की न्यूनतम निरोधात्मक सांद्रता ऑप्टिकल घनत्व में परिवर्तन से निर्धारित होती है। सिस्टम कम्प्यूटरीकृत है और स्वचालित रूप से सभी आवश्यक गणना करता है।
विटेक सिस्टम।यह प्रणाली तीस कुओं के साथ एक प्रकार की प्लेटों का उपयोग करती है। माइक्रोबियल निकायों की एक ज्ञात एकाग्रता के साथ बैक्टीरिया का निलंबन स्वचालित रूप से प्रत्येक कुएं में जोड़ा जाता है। सूक्ष्मजीवों (हीमोफिल, निसेरिया, यीस्ट और एनारोबेस) की पहचान कुएं में प्रतिक्रिया माध्यम की टर्बिडोमेट्री पर आधारित है। सूक्ष्मजीव के गुणों के आधार पर, इसकी पहचान के लिए आवश्यक समय 4-8 से 18 घंटे तक भिन्न होता है। सिस्टम पूरी तरह से कम्प्यूटरीकृत है और स्वचालित रूप से काम करता है।

न्यूक्लिक एसिड पहचान के तरीके

रोगजनकों के आरएनए और डीएनए का पता लगाने के तरीकों ने मुख्य रूप से वायरल संक्रमण के निदान में आवेदन पाया है। फिर भी, कुछ फ़ास्टिडियस बैक्टीरिया (उदाहरण के लिए, लेगियोनेला, क्लैमाइडिया) की पहचान के साथ-साथ कॉलोनियों की पहचान के लिए परीक्षण प्रणाली विकसित की गई है। निसेहा गोनोरिया, हीमोफिलस इन्फ्लुएंजाटाइप बी, ग्रुप बी स्ट्रेप्टोकोकी, एंटरोकोकी और माइकोबैक्टीरिया।

न्यूक्लिक एसिड का संकरण

न्यूक्लिक एसिड के संकरण की सबसे आम विधियाँ। विधियों का सिद्धांत डीएनए (और आरएनए) की क्षमता के कारण कृत्रिम रूप से बनाए गए डीएनए (और आरएनए) के पूरक टुकड़ों के साथ विशेष रूप से गठबंधन (संकरण) करने के लिए आइसोटोप या एंजाइम (पेरोक्सीडेज या क्षारीय फॉस्फेट) के साथ लेबल किया गया है। भविष्य में, नमूनों की जांच विभिन्न तरीकों से की जाती है (उदाहरण के लिए, एलिसा)।

समाधान संकरण विधिसबसे तेज परिणाम देता है। न्यूक्लिक एसिड के अनबाउंड स्ट्रैंड को हटाने की समस्या विधि के व्यापक कार्यान्वयन में बाधा डालती है।

ठोस आधार संकरण विधिऔर इसका सैंडविच संशोधन अधिक सामान्य है। नाइट्रोसेल्यूलोज या नायलॉन से बनी झिल्ली एक ठोस आधार के रूप में काम करती है। अनबाउंड अभिकर्मकों को बार-बार धोने से हटा दिया जाता है।

परीक्षण प्रणालियों का उपयोग कर जीवाणुओं की जैव रासायनिक पहचान

ऐसी परीक्षण प्रणालियों के अन्य प्रकार कागज या बहुलक वाहक पर विभेदक सब्सट्रेट के सोखने के लिए प्रदान करते हैं। इनमें ऑक्सटैब, मिनिटेक, मोरलोक, माइक्रो-आईडी सिस्टम आम हैं।

इस तरह की प्रणालियों का उपयोग करना आसान है, वे आपको एक साथ माइक्रोबियल लक्षणों की एक विस्तृत श्रृंखला का अध्ययन करने की अनुमति देते हैं, किसी भी सूक्ष्मजीवविज्ञानी प्रयोगशालाओं में उपयोग के लिए हमेशा तैयार रहते हैं, वे सरल और विश्वसनीय होते हैं, उन्हें कम मात्रा में इनोकुलम की आवश्यकता होती है, इसलिए वे प्रयोगशाला कांच के बने पदार्थ, पिपेट को बचाते हैं। प्राप्त परिणामों का कंप्यूटर प्रसंस्करण अज्ञात रोगज़नक़ों के प्रकार को जल्दी से निर्धारित और मूल्यांकन करना संभव बनाता है।

पोषक माध्यम का उत्पादन।किसी भी माध्यम की संरचना में मुख्य रूप से प्राकृतिक पशु या पौधों के उत्पाद और घटक शामिल हैं - मांस, मछली का भोजन, अंडे, दूध, रक्त, खमीर निकालने, आलू, और इसी तरह। विशेष अर्ध-तैयार उत्पाद उनसे अर्क, जलसेक, एंजाइमैटिक और एसिड हाइड्रोलिसेट्स (मांस का पानी, खमीर निकालने, हॉटिंगर ट्राइप्टिक हाइड्रोलाइज़ेट, पेप्टोन, और अन्य) के रूप में तैयार किए जाते हैं, जो पोषक मीडिया के बाद के डिजाइन के लिए आधार हैं। इसके अलावा, विभिन्न अकार्बनिक लवणों को पोषक माध्यम में जोड़ा जाता है, जो माइक्रोबियल सेल की जरूरतों पर निर्भर करता है। एक नियम के रूप में, सोडियम क्लोराइड की सांद्रता 5.0 g / l, KH2PO4 - 0.2-0.5 g / l, MgSO4 7H2O है, अन्य लवण 0.001 g / l की दर से जोड़े जाते हैं। आवश्यक मामलों में, कार्बोहाइड्रेट (शर्करा, पॉलीहाइड्रिक अल्कोहल), 0.5-1.0% की एकाग्रता में अमीनो एसिड, साथ ही साथ विटामिन (0.001 मिलीग्राम / एमएल तक) को संरचना में जोड़ा जाता है।

माध्यम के आवश्यक घनत्व को सुनिश्चित करने के लिए, अगर-अगर का उपयोग किया जाता है, जो समुद्री शैवाल से प्राप्त होता है। यह मीडिया का एक सुविधाजनक और आवश्यक घटक है, क्योंकि यह बैक्टीरिया द्वारा विकास सब्सट्रेट के रूप में नहीं खाया जाता है। पानी में एक जेल बनाकर, यह लगभग 100 ° C के तापमान पर पिघलता है, और 40 ° C पर गाढ़ा हो जाता है। जिलेटिन का स्रोत कोलेजन युक्त सबस्ट्रेट्स हैं। इनमें कार्टिलेज, टेंडन, हड्डियां आदि शामिल हैं। जेल, जो जिलेटिन के उपयोग के परिणामस्वरूप प्राप्त होता है, लगभग 32-34 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर पिघलता है और 28 डिग्री सेल्सियस पर जम जाता है। हालांकि, कई सूक्ष्मजीव जिलेटिन को तोड़ने में सक्षम हैं, इसलिए बाद वाले को मध्यम भराव के रूप में उपयोग करना अनुचित माना जाता है। सबसे अधिक बार, जिलेटिन के साथ ऐसे मीडिया का उपयोग बैक्टीरिया के प्रोटियोलिटिक गुणों को निर्धारित करने के लिए किया जाता है।

पोषक माध्यम का उत्पादन एक जटिल गतिशील प्रक्रिया है जिस पर एक बैक्टीरियोलॉजिस्ट के ध्यान की आवश्यकता होती है। इस प्रक्रिया में कई मुख्य चरण होते हैं। सबसे पहले, माध्यम के आवश्यक सूखे घटकों को नुस्खे के अनुसार आसुत जल में मिलाया जाता है, अच्छी तरह मिलाया जाता है, गर्म होने पर घुल जाता है। माध्यम के पीएच को सेट करना सुनिश्चित करें, जो या तो आयनोमीटर या संकेतक पेपर का उपयोग करके निर्धारित किया जाता है। इस मामले में, यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि नसबंदी के बाद, माध्यम की प्रतिक्रिया 0.2 से कम हो जाती है। आगर युक्त मीडिया को कॉटन-गॉज फिल्टर के माध्यम से गर्म अवस्था में, तरल मीडिया को पेपर फिल्टर के माध्यम से फ़िल्टर किया जाता है। यदि आवश्यक हो, तो उन्हें वर्षा द्वारा या अंडे की सफेदी या मट्ठा की सहायता से स्पष्ट किया जाता है। मीडिया को विशेष गद्दे, फ्लास्क, शीशियों में डाला जाता है और पेपर कैप के साथ कपास-धुंध स्टॉपर्स के साथ बंद कर दिया जाता है। माध्यम की संरचना के आधार पर, नसबंदी के विभिन्न तरीकों का उपयोग किया जाता है। हां, मीडिया जिसमें कार्बोहाइड्रेट होते हैं, जिलेटिन को आटोक्लेव में 112 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर या 100 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर तरल वाष्प के साथ 15 मिनट के लिए निष्फल किया जाता है। बिना कार्बोहाइड्रेट वाले मीडिया को आटोक्लेव में 115-120 डिग्री सेल्सियस पर 20 मिनट के लिए निष्फल किया जा सकता है। यदि मीडिया की संरचना में ऐसे घटक शामिल हैं जो तापमान के लिए अस्थिर हैं, जैसे कि देशी प्रोटीन, मट्ठा, यूरिया, तो उन्हें या तो जीवाणु फिल्टर के माध्यम से निस्पंदन द्वारा निष्फल कर दिया जाता है, या उन्हें बाँझ माध्यम में तैयार किया जाता है। मीडिया की बंध्यता को 37 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर कई दिनों तक थर्मोस्टेट में विट्रिफाइंग करके नियंत्रित किया जाता है।

हम कुछ सरल पोषक माध्यमों के निर्माण का उदाहरण देते हैं, जो अक्सर सूक्ष्मजीवविज्ञानी अभ्यास में उपयोग किए जाते हैं और अधिक जटिल लोगों के निर्माण का आधार हो सकते हैं।

मांस का पानी. इसके निर्माण के लिए, ताजा गोमांस का उपयोग किया जाता है, जिसे पहले वसा, प्रावरणी, कण्डरा और इसी तरह से साफ किया जाता है, छोटे टुकड़ों में काटकर मांस की चक्की के माध्यम से पारित किया जाता है। परिणामस्वरूप कीमा बनाया हुआ मांस 1: 2 के अनुपात में नल के पानी के साथ डाला जाता है, हिलाया जाता है और एक दिन के लिए ठंडे स्थान पर छोड़ दिया जाता है। परिणामस्वरूप जलसेक को 30-60 मिनट के लिए उबाला जाता है, समय-समय पर पैमाने को हटा दिया जाता है, और फिर बचाव किया जाता है। तरल को कीमा बनाया हुआ मांस से अलग किया जाता है, फिल्टर पेपर या कपड़े के माध्यम से फ़िल्टर किया जाता है और प्राथमिक मात्रा में नल के पानी के साथ ऊपर रखा जाता है, फिर शीशियों में डाला जाता है और 30 मिनट के लिए 1 वातावरण (तापमान 120 डिग्री सेल्सियस) पर निष्फल कर दिया जाता है। बाँझ मांस का पानी पारदर्शी होता है, इसका रंग पीला होता है, और बोतल की दीवारों पर और नीचे प्रोटीन का एक अवक्षेप होता है जो जमा हुआ होता है। इसलिए, माध्यम के बाद के उपयोग के दौरान, इसे फिर से फ़िल्टर किया जाता है। माध्यम की सक्रिय प्रतिक्रिया 6.2 है।

मांस-पेप्टोन शोरबा (एमपीबी)।बीसीएच बनाने के लिए, मांस के पानी में 1% पेप्टोन और 0.5% सोडियम क्लोराइड मिलाया जाता है, आवश्यक पीएच को 20% NAOH समाधान के साथ समायोजित किया जाता है और लगातार हिलाते हुए 30-40 मिनट तक उबाला जाता है। शोरबा को कागज या लिनन फिल्टर के माध्यम से फ़िल्टर किया जाता है, बोतलों, टेस्ट ट्यूबों में डाला जाता है, माध्यम की सक्रिय प्रतिक्रिया की जांच की जाती है और 120 डिग्री सेल्सियस पर 20 मिनट के लिए निष्फल किया जाता है।

मायासो-पेप्टोनियागर (एमपीए)।मांस-पेप्टोन शोरबा में बारीक कटा हुआ अगर-अगर (2-2.5%) मिलाया जाता है। परिणामी मिश्रण को अगर-अगर भंग करने के लिए उबाला जाता है, फ़िल्टर किया जाता है, पीएच समायोजित किया जाता है और शीशियों में डाला जाता है। 120 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 20 मिनट के लिए नसबंदी की जाती है।

रक्त, सीरम या जलोदर द्रव के साथ मीडिया।चूंकि इन मीडिया को लंबे समय तक संग्रहीत नहीं किया जा सकता है, इसलिए इन्हें उपयोग से तुरंत पहले तैयार किया जाता है। ऐसा करने के लिए, मेढ़े, खरगोश या अन्य जानवर के ताजा या डिफिब्रिनेटेड रक्त का 5-10% बाँझ रूप से पिघलाकर 45-50 डिग्री सेल्सियस एमपीए तक ठंडा करें। अगर शीशियों को अच्छी तरह मिलाया जाता है और पेट्री डिश में डाला जाता है, यह सुनिश्चित करते हुए कि कोई झाग नहीं है।

सीरम (5-10% सीरम) या एसिटिक अगर (25% जलोदर द्रव) समान रूप से तैयार किया जाता है।

Hottinger के लिए Triptychniydig।इसका शोरबा अन्य मांस-पेप्टोन मीडिया की तुलना में अधिक किफायती है, क्योंकि यह आपको मांस की एक सर्विंग से कई गुना अधिक शोरबा प्राप्त करने की अनुमति देता है। इस माध्यम में बड़ी मात्रा में अमीनो एसिड होते हैं, इसलिए इसकी बफरिंग क्षमता बढ़ जाती है, और इसके कारण, माध्यम की सक्रिय प्रतिक्रिया का मूल्य अधिक स्थिर होता है।

डाइजेस्ट बनाने के लिए, वे बिना टेंडन और वसा के एक किलोग्राम मांस लेते हैं, 1-2 सेंटीमीटर आकार के छोटे टुकड़ों में काटते हैं, एक बर्तन में पानी की दोगुनी मात्रा में उबालते हैं, और 15-20 मिनट तक उबालते हैं। मांस ग्रे हो जाता है, जो प्रोटीन जमावट को इंगित करता है। इसे तरल से हटा दिया जाता है और मांस की चक्की के माध्यम से पारित किया जाता है। जो तरल रहता है, उसमें पीएच 8.0 पर सेट होता है, कीमा बनाया हुआ मांस वहां उतारा जाता है और 40 डिग्री सेल्सियस तक ठंडा किया जाता है। फिर ताजा अग्न्याशय के 10% (तरल की मात्रा में) जोड़ें, पहले संयोजी ऊतक, वसा से साफ किया और दो बार मांस की चक्की के माध्यम से पारित किया। ग्रंथि के बजाय, अग्नाशय (0.5%) की सूखी तैयारी का उपयोग किया जाता है। परिणामी मिश्रण को अच्छी तरह से हिलाया जाता है और पीएच को 7.8-8.0 पर समायोजित किया जाता है। 30 मिनट के बाद, पीएच की जांच करें। यदि माध्यम की सक्रिय प्रतिक्रिया अम्लीय पक्ष में नहीं बदलती है, तो यह एंजाइम की खराब गुणवत्ता को इंगित करता है। जब माध्यम का पीएच स्थिर हो जाता है, तो मिश्रण को बड़ी बोतलों में डालकर 1/3 भर दिया जाता है। 3% तक क्लोरोफॉर्म मिलाएं, रबर स्टॉपर्स के साथ बर्तन बंद करें और तरल पदार्थ मिलाने के लिए जोर से हिलाएं। अतिरिक्त क्लोरोफॉर्म वाष्प निकलता है। 1-2 वर्षों के बाद, माध्यम का पीएच फिर से जांचा जाता है, इसे 7.4-7.6 पर सेट किया जाता है।

सामग्री जोड़ें

परिणामस्वरूप मिश्रण को कमरे के तापमान पर 16 दिनों तक छोड़ दिया जाता है। पहले 3-4 दिनों के दौरान, माध्यम के पीएच की जाँच की जाती है और दैनिक समायोजित किया जाता है, और शीशियों को दिन में कम से कम 3 बार हिलाया जाता है। बाद में, इस प्रक्रिया को छोड़ा जा सकता है और माध्यम को बार-बार हिलाना नहीं चाहिए। पाचन चक्र की समाप्ति से 1-2 दिन पहले, माध्यम की हलचल बंद हो जाती है।

पूर्ण उच्च-गुणवत्ता वाला पाचन तरल के स्पष्टीकरण से प्रकट होता है, जो एक पुआल-पीला रंग प्राप्त करता है, साथ ही तल पर एक धूल भरी तलछट का निर्माण होता है। तरल को आसानी से फ़िल्टर किया जाता है, ब्रोमीन पानी के साथ एक नमूने का उपयोग करके ट्रिप्टोफैन की उपस्थिति के लिए जाँच की जाती है (निस्पंद के 3-4 मिलीलीटर में ब्रोमीन पानी की 3-4 बूंदें डाली जाती हैं)। ट्रिप्टोफैन (2.0-3.0 g/l तक) की उपस्थिति में, माध्यम का रंग गुलाबी-बैंगनी रंग में बदल जाता है। कुल नाइट्रोजन निर्धारित किया जाता है, जो सामान्य रूप से 11.0-12.0 g/l, और अमीन नाइट्रोजन (7.0-9.0 g/l तक) तक पहुंचता है।

हाइड्रोलाइज़ेट को एक पेपर या लिनन फ़िल्टर के माध्यम से फ़िल्टर किया जाता है, बोतलबंद और 120 डिग्री सेल्सियस पर 30 मिनट के लिए ऑटोक्लेव किया जाता है। इस रूप में, इसे लंबे समय तक संग्रहीत किया जा सकता है।

इसका उपयोग हॉटिंगर शोरबा बनाने के लिए किया जाता है। इस प्रयोजन के लिए, हाइड्रोलाइज़ेट के 100-200 मिलीलीटर तक, आसुत जल के 800-900 मिलीलीटर, 0.5% सोडियम क्लोराइड और 0.2% मोनोसुबस्टिट्यूटेड सोडियम फॉस्फेट को जोड़ा जाता है। पीएच को 7.4-7.6 तक समायोजित किया जाता है, शीशियों में डाला जाता है और 120 डिग्री सेल्सियस पर 20 मिनट के लिए निष्फल किया जाता है।

हॉटिंगर के हाइड्रोलाइजेट पर आधारित मीट-पेप्टन अगर सामान्य एमपीए की रेसिपी के अनुसार तैयार किया जाता है।

आज, एक नियम के रूप में, बैक्टीरियोलॉजिस्ट मानक शुष्क संस्कृति मीडिया का उपयोग करने का प्रयास करते हैं जो बैक्टीरियोलॉजिकल उद्योग द्वारा उत्पादित होते हैं। ऐसे मीडिया सूक्ष्मजीवविज्ञानी अध्ययनों के परिणामों में उल्लेखनीय सुधार कर सकते हैं और उनका मानकीकरण कर सकते हैं।

बैक्टीरिया की खेती के लिए, प्रोटीन मुक्त मीडिया का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है, जिसमें रोगजनक, जीवाणु प्रजातियों सहित कई ऑर्गेनोट्रोफिक अच्छी तरह से विकसित होते हैं। इन वातावरणों में कई घटक शामिल हैं।

लेबल किए गए परमाणुओं की विधि का उपयोग करके सिंथेटिक मीडिया में खेती से बैक्टीरिया को उनके जैवसंश्लेषण की प्रकृति के अनुसार अधिक विस्तार से अलग करना संभव हो जाता है।

प्रोटोट्रोफिक और ऑक्सोट्रोफिक बैक्टीरिया के भेदभाव के लिए व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है चयनात्मक मीडिया.

प्रोटोट्रॉफ़ एक न्यूनतम वातावरण में विकसित होते हैं जिसमें केवल लवण और कार्बोहाइड्रेट होते हैं, क्योंकि वे स्वयं उन मेटाबोलाइट्स को संश्लेषित कर सकते हैं जिनकी उन्हें विकास के लिए आवश्यकता होती है, जबकि ऑक्सोट्रोफ़ को ऐसे वातावरण की आवश्यकता होती है जिसमें कुछ अमीनो एसिड, विटामिन और अन्य पदार्थ हों।

घने पोषक माध्यम पर, बैक्टीरिया आकार और आकार में भिन्न होते हैं कालोनियों- एक ही प्रजाति के सूक्ष्मजीवों का दृश्य संचय, जो एक या अधिक कोशिकाओं से प्रजनन के परिणामस्वरूप बनता है। कॉलोनियां सपाट, उत्तल, गुंबद के आकार की, दबी हुई होती हैं, उनकी सतह चिकनी (एस-आकार की), खुरदरी (आर-आकार की), धारीदार, ट्यूबरकुलेट होती है, किनारे सम, दांतेदार, रेशेदार, झालरदार होते हैं। उपनिवेशों का आकार भी विविध है: गोल, रोसेट के आकार का, तारकीय, पेड़ जैसा। आकार (व्यास) के अनुसार, कॉलोनियों को बड़े (4-5 मिमी), मध्यम (2-4 मिमी), छोटे (1-2 मिमी) और बौने (1 मिमी से कम) में विभाजित किया गया है।