Типирование по антигенам системы hla применяется. HLA-типирование и его роль при бесплодии. Иммунотерапия при совпадении антигенов

Роль системы тканевой совместимости человека

Система биологической (тканевой) совместимости человека (HLA) II класса выполняет в организме ряд важных защитных функций:

Иммунный ответ на внедрение инфекции;
-удаление из организма опухолевых клеток;
-развитие приобретенного иммунитета.

Термин «HLA» (Human Leukocyte Antigen) используется в связи с тем, что все антигены (белки) этой системы расположены на поверхности лейкоцитов. За работу HLA отвечают три гена, локализованные на коротком плече 6-й хромосомы: DRB1, DQA1, DQB1. Каждый ген представлен двумя вариантами (аллелями), унаследованными от родителей: один – от папы, другой – от мамы. В генах закодированы определенные признаки. Если аллели разные (гетерозигота), то проявляется «сильный» (доминантный) признак, если одинаковые (гомозигота) - «слабый» (рецессивный). Имеется чрезвычайное разнообразие (около 3000) аллелей генов HLA.

Предрасположенность к аутоиммунным заболеваниям

Как мы уже сказали, система гистосовместимости HLA отвечает за иммунный ответ. Обратной стороной ее работы могут стать аутоиммунные процессы – синтез защитных антител на собственные клетки и их разрушение.

В настоящее время установлена причастность определенных вариантов HLA-генов класса II к развитию таких аутоиммунных заболеваний, как сахарный диабет (СД) 1 типа, ревматоидный артрит, болезнь Крона, язвенный колит, системная красная волчанка, аутоиммунный гепатит, атопический дерматит, аутоиммунный тиреоидит и пр.

Одними из первых проявлений аутоиммунных расстройств могут стать бесплодие и невынашивание беременности из-за поражения собственными антителами различных антигенов репродуктивной и эндокринной систем: яйцеклеток, сперматозоидов, половых гормонов и пр.

Биологическая совместимость и имплантация зародыша

Система гистосовместимости, даже при отсутствии аутоиммунных заболеваний, влияет на зачатие, имплантацию (внедрение эмбриона) и течение беременности. Зародыш, образующийся после слияния мужской и женской половых клеток, имеет на своей поверхности специальные белки – антигены. Для нормальной имплантации очень важна их «чужеродность». Появление «белков-незнакомцев» эмбриона запускает в организме матери особые иммунные реакции, направленные на сохранение беременности: блокируются специальные NK-клетки-киллеры (убийцы), которые могут спровоцировать выкидыш.

Необходимая «чужеродность» антигенов может возникнуть у эмбриона лишь в том случае, если HLA-гены матери и отца отличаются друг от друга. Совпадение некоторых аллелей HLA-генов (полное совпадение бывает у близких родственников) ведет к появлению HLA-гомозиготного плода, что является неблагоприятным фактором для нормального течения беременности.

HLA-гены и невынашивание беременности

В последнее время установлено: чем больше у супружеской пары совпадений по аллелям HLA-генов, тем выше вероятность прерывания беременности. Треть супружеских пар с привычным невынашиванием имеют 2-3 совпадения. При наличии 4-х и более идентичных аллелей повторные выкидыши и неудачные попытки ЭКО случаются у большинства пар.

Большое число совпадающих антигенов HLA II класса приводит к отсутствию достаточного иммунного ответа у матери. Эмбрион не распознается как плод, а воспринимается как скопление собственных измененных клеток, против которых иммунная система начинает работать на уничтожение.

Это вызывает некроз в плодовых оболочках и раннее прерывание беременности. Таким образом, несовпадение супругов по HLA-антигенам и отличие антигенов зародыша от материнских HLA-белков являются необходимыми для сохранения беременности факторами.

Важное значение для вынашивания имеет не только число совпадений, но и набор аллей у каждого из супругов. Так, в парах с тремя и более выкидышами выявлено увеличение числа некоторых аллелей: у женщин – DQB1 0301, 0501, 0602; у мужчин – DRB1 10, 12; DQA1 0102, DQA1 0301, 0102; DQB1 0501, 0602. Также при повторных выкидышах снижается частота встречаемости аллелей DRB1 03 и DQB1 0303 как у женщин, так и у мужчин, что говорит об их защитном эффекте на течение беременности.

Кроме того, установлено, что определенные аллели могут нарушать процесс сперматогенеза у мужчин и влиять на качество половых клеток, что впоследствии сказывается на полноценности эмбриона.

Обследование на HLA-совместимость

Исследование HLA-совместимости не входит в алгоритм первичного обследования бесплодных пар. Его рекомендуют проводить лишь у супругов с привычным невынашиванием беременности, а также после 2-х и более неудачных попыток ЭКО.

Биологическая несовместимость партнеров по генам HLA класса II может быть констатирована, если у обследуемых выявлено большое число совпадений (четыре и более – из шести возможных) по генам DRB1, DQA1, DQB1.

При подозрении на гистонесовместимость партнеров, помимо генотипирования, выполняются следующие иммунологические методы обследования будущей мамы:

Анализ состава лимфоцитов в крови;
-оценка интерферонового статуса;
-определение блокирующих свойств женской сыворотки (БФ);
-концентрация антиотцовских антилейкоцитарных антител (АОАТ);
-уровень аутоантител (антифосфолипидных антител, волчаночного антикоагулянта);
-содержание антител к хорионическому гонадотропину;
-определение чувствительности к иммуномодуляторам.

У женщин с бесплодием и привычным невынашиванием может быть повышен уровень NK-клеток (киллеров), сывороточного интерферона, а также снижены: интерфероновая реакции лейкоцитов и содержание БФ и АОАТ.

Однако стоит заметить, что процессы иммунной регуляции репродуктивного здоровья являются сложными и недостаточно изученными, а роль HLA-антигенов до сих пор признается не всеми специалистами.

Кроме того, помимо системы HLA, имеются и другие факторы, влияющие на течение беременности: тромбофилии, нарушение фолатного обмена, гипергомоцистеинемия, хромосомные аномалий плода и пр. Анализы на их выявление также необходимо включать в алгоритм обследования при невынашивании беременности.

«Прививка» лимфоцитами мужа

На сегодняшний день данные мировой литературы весьма противоречивы по вопросу возможной коррекции иммунных нарушений репродуктивного здоровья. Тем не менее, в настоящее время при выявлении иммунологической несовместимости партнеров по генам HLA у супругов с привычным невынашиванием беременности и неудачными попытками ЭКО в качестве основного метода терапии используется активная иммунизация женщины («прививка») лимфоцитами мужа – лимфоцитоиммунотерапия (ЛИТ).

Механизм ее действия состоит в активации иммунного ответа у матери, направленного на поддержание имплантации эмбриона, в ответ на подкожное введение лейкоцитов отца будущего ребенка.

Противопоказаниями для проведения ЛИТ являются: гепатиты В и С, перенесенные партнером; вирусные заболевания в остром периоде. В этих случаях при необходимости используют лимфоциты обследованного донора.

Для нормализации показателей интерферонового статуса на первом этапе назначают индукторы интерферона (галавит, иммуномакс, имунофан) в зависимости от выявленной чувствительности к препарату.

Затем выполняется ЛИТ. Для этого женщине внутрикожно вводят предварительно полученные лейкоциты мужа в дозе 50-100 млн с последующим (через 3 недели) контролем показателей функционального состояния иммунной системы. В дальнейшем возможно увеличение дозы лимфоцитов (100 или 150 млн. клеток) в зависимости от количества совпадений по HLA антигенам и показателей иммунного статуса.

Процедуру проводят на 5-9 день менструального цикла 1 раз в месяц за 2-3 месяца до планируемого зачатия или программы ЭКО под контролем функционального состояния иммунной системы (анализа состава лимфоцитов крови, показателей БФ и АОАТ).

После ЛИТ у женщины повышаются значения БФ и АОАТ в 1,5 и 3 раза, соответственно. Как результат, у супружеских пар с совпадениями по HLA увеличивается частота наступления беременности в 2 раза. Наиболее выраженный эффект данной терапии наблюдается у супругов, имеющих 4 и более совпадений по системе HLA: они беременеют в 3-4 раза чаще, чем «непривитые» пары. После зачатия ЛИТ продолжают весь первый триместр, начиная с 4-5 недели, далее каждые 3-4 недели под контролем уровня БФ.

«Прививка» лимфоцитами мужа позволяет женщинам с иммунологическим невынашиванием зачать и выносить здорового малыша!

Всегда с вами,

Многочисленные неудачи при попытках зачать ребенка могут обуславливаться иммунными нарушениями у супругов. Одно из самых распространенных таких нарушений – идентичность HLA-антигенов женщины и мужчины. Поэтому парам, которым длительное время не удается зачать ребенка, рекомендуют проверить HLA-совместимость. Анализ крови HLA на совместимость супругов позволяет определить степень «несовместимости». HLA-типирование дает возможность уточнить причины бесплодия и определить дальнейшую тактику лечения пары.

Анализ HLA типирование

На поверхности всех клеток организма имеются особые рецепторы – белковые антигены главного комплекса гистосовместимости. Уникальность структуры этих рецепторов у каждого человека обеспечивает надежность работы иммунной системы, функционирующей по принципу «свой-чужой». На поверхности лейкоцитов находится больше всего HLA-антигенов. При изменении структуры рецепторов (обнаружения чужеродного тела или опухолевого перерождения клетки) антиген связывается иммунными клетками и посредством НLА – комплекса инициируется запуск иммунного ответа.

Плод получает от каждого из родителей по одному гену, наследуя, таким образом, от них по 50% генетической информации. То, что для организма матери ребенок – чужеродное тело, запускает определенные иммунологические реакции, которые способствуют сохранению беременности. Различия белковых структур антигенов НLА плода и матери – важный фактор для полноценного развития беременности. Организм матери в норме с самых ранних сроков вырабатывает к антигенам ребенка антитела. Когда антигены НLА родителей похожи, что случается при близкородственном браке, в следствии каких-либо эндокринных или иммунологических нарушений у матери, нарушается антигенная стимуляция, и течение беременности осложняется тяжелыми гестозами или может самопроизвольно прерваться. Каждый третий случай бесплодия и привычного невынашивания беременности обусловлен генетическими особенностями пары.

Чтобы определить степень схожести антигенов НLА паре проводят анализ HLA-типирования. Для анализа делают забор венозной крови, из которой выделяют лейкоциты, затем, используя метод полимеразной цепной реакции, проводят HLA-типирование.

Когда необходимо сдавать анализ на совместимость

Желательно, чтобы будущие родители ещё до предполагаемого зачатия прошли клиническое обследование. Назначение необходимых анализов и выдача направления на обследование производится терапевтом и гинекологом. Когда все анализы отличные, а беременность не наступает, то причина может быть не в состоянии здоровья партнеров по отдельности, а скрываться в иммунологической совместимости пары.

Схожесть партнеров по показателям тканевой совместимости служит причиной недостаточной активности иммунной системы женщины, в результате в организме не запускаются реакции, которые необходимы для зачатия и сохранения беременности.

Нередко организм женщины воспринимает сперматозоиды мужчины, как вредоносные агенты, и начинает интенсивную выработку белков-антител, которые их обезвреживают, подавляя способность к оплодотворению. Невозможность встречи сперматозоидов с яйцеклеткой делает и наступление беременности невозможным.

Таким образом, случаи, когда необходимо сдавать анализ на совместимость, нередки. Для исключения возможности возникновения подобных проблем у пары, обоим нужно сдать анализ крови на совместимость, HLA-типирование.

Иммунизация

Когда после консультации с врачом, парой принимается решение продолжать попытки зачатия общего ребенка, то может быть рекомендовано проведение процедуры активной или пассивной иммунизации.

Активная иммунизация матери проводится концентрированной культурой лимфоцитов партера или донора, и позволяет преодолеть проблему сходства партнеров по HLA-антигенам. Процедура должна «научить» женский организм распознавать клетки партнера. Обычно процедуру проводят в три этапа при помощи препарата, который изготавливают из крови партнера или донора. На сегодняшний день мнения специалистов генетиков и иммунологов о эффективности иммунотерапии лимфоцитами разделались пополам. Одной стороной этот метод считается средством спасения, а другой вовсе отрицается её всяческий смысл.

Некоторые данные свидетельствуют о 60% случаев эффективности тщательно подобранного и вовремя назначенного метода активной иммунизации. Процедуру иммунизации лимфоцитами, к сожалению, сейчас можно пройти только в некоторых крупных городах.

Пассивная иммунизация является более доступной, для нее нет необходимости в длительном периоде подготовки, но данные об её эффективности противоречивы. Этот метод состоит в иммунизации матери при помощи препаратов иммуноглобулинов. Препарат назначается исключительно врачом, как правило, внутривенно, в три этапа.

Важность этих анализов состоит в том, что они предоставляют паре возможность осознанного выбора при оценке всех рисков в пользу продолжения попыток зачатия или в пользу услуг банка яйцеклеток и спермы. Поэтому перед принятием такого серьезного решения, необходимо владеть соответствующей информацией и заручиться мнением нескольких специалистов иммунологов и генетиков.

HLA-типирование 2 класса

Для чего это нужно:

HLA-типирование супругов проводят при диагностике бесплодия, перед планированием беременности и подготовкой к ЭКО, при невынашивании беременности и эпизодах неудачных попыток ЭКО, а также супругам, находящимся в родственной связи.

HLA-типирование – анализ генотипирования аллелей I и/или II классов для определения наличия схожести HLA-антигенов.

HLA-антигены (human leucocyte antigens) тканевой совместимости (cиноним: MHC - major histocompatibility complex - главный комплекс гистосовместимости) – белки, расположенные на поверхности большинства клеток и выполняющие роль своеобразных "антенн", позволяющих организму распознавать собственные и чужие клетки (бактерии, вирусы, раковые клетки и т.д.) и при необходимости запускать иммунный ответ, обеспечивающий выработку специфических антител и удаление чужеродного агента из организма.

Синтез белков HLA-системы определяется генами главного комплекса гистосовместимости, которые расположены на коротком плече 6-й хромосомы. Выделяют два основных класса генов главного комплекса гистосовместимости:

I класс включает гены локусов А, В, С –

II класс - D-область (сублокусы DR, DP, DQ) -

HLA-антигены 1 класса представлены на поверхности практически всех клеток организма, в то время, как HLA-антигены 2 класса выражены преимущественно на клетках иммунной системы, макрофагах, эпителиальных клетках.

HLA-типирование проводят в следующих случаях:

1.диагностика бесплодия у супругов, возникающая из-за сходства HLA-антигенов.

При наследовании HLA-антигенов тканевой совместимости ребенок получает по одному гену каждого локуса от обоих родителей, т.е. половина антигенов тканевой совместимости наследуется от матери и половина от отца. Таким образом, ребенок является наполовину чужеродным для организма матери. Эта "чужеродность" является нормальным физиологическим явлением, запускающим иммунологические реакции, направленные на сохранение беременности. Формируется клон иммунных клеток, вырабатывающий специальные "защитные" (блокирующие) антитела. Несовместимость супругов по HLA антигенам и отличие зародыша от материнского организма является важным моментом, необходимым для сохранения и вынашивания беременности. При нормальном развитии беременности "блокирующие" антитела к отцовским HLA-антигенам появляются с самых ранних сроков беременности. Причем, самыми ранними являются антитела к антигенам 2 класса гистосовместимости.

Сходство супругов по антигенам тканевой совместимости приводит к "похожести" зародыша на организм матери, что становится причиной недостаточной антигенной стимуляции иммунной системы женщины, и необходимые для сохранения беременности реакции не запускаются. В результате зародыш воспринимается как чужеродные клетки. В таком случае происходит самопроизвольное прерывание беременности.

2.идентификация личности и определение отцовства.

Каждый человек обладает индивидуальным набором HLA-антигенов, который представляет собой так называемый биометрический паспорт клетки, точно обозначающий принадлежность к конкретному организму.

3.подбор доноров для трансплантации органов и тканей.

HLA-несовместимость является главной причиной клинических и иммунологических проблем после трансплантации и основным лимитирующим фактором выбора донора для трансплантации. Благоприятный прогноз пересадки органа выше при наибольшем сходстве донора и реципиента по антигенам тканевой совместимости.

4.определение предрасположенности к различным заболеваниям.

При определении различных антигенов HLA можно рассчитать относительный риск возникновения целого ряда заболеваний, таких как целиакия (некоторые аллели локусов HLA-DQB1 и HLA-DQA1), синдром Рейтера, ревматоидный артрит, ишемическая болезнь сердца, гипертоническая болезнь, сахарный диабет I типа и другие.

Генотипирование супружеской пары (HLA II класса) - генетическое исследование, которое определяет разновидности HLA II класса у обоих супругов. Анализ помогает выявить иммунологические факторы невынашивания беременности.

Система HLA (Human Leucocyte Antigen) - определяет гистосовместимость тканей и представляет набор различных типов белков, которые присутствуют на поверхности клеток. Каждому человеку свойственен свой набор HLA антигенов.

Гены, кодирующие белки системы HLA расположены на коротком плече 6-ой хромосомы.

Существует два класса HLA антигенов: HLA I класса и HLA II класса. Антигены первого класса системы находятся на поверхности всех клеток организма. Кодирующие их гены расположены в трех локусах А, В и С, они отличаются высокой степенью полиморфизма. Гены HLA II представлены локусами в D области: HLA-DQ, -DP и -DR. Антигены присутствуют на поверхности клеток иммунной системы: лимфоциты, моноциты, макрофаги, эпителиальные клетки.

Для нормального протекания беременности, ключевое значение имеет отсутствие совместимости по HLA II класса.

Во время беременности будущий ребенок наследует два аллеля каждого гена HLA - один от матери, другой от отца. Для материнского организма отцовские антигены плода являются чужеродными. Женский организм вырабатывает защитные антитела, которые связываются с отцовскими HLA-антигенами плода и защищают их. Это способствует нормальному развитию плода и протеканию беременности.

В случае, когда у родителей есть совпадения по 3 и более антигенам HLA II класса, образование защитных антител резко снижается или не происходит. Для иммунной системы матери развивающийся плод становится чужим, запускаются механизмы, направленные на его элиминирование. Происходит отторжение эмбриона и выкидыш.

Чем больше совпадений по антигенам, тем выше риск неправильного иммунного ответа со стороны матери на плод во время беременности.

• привычное невынашивание беременности;
• неудачные попытки ЭКО.

Одновременно производится забор крови у обоих супругов.

Интерпретация результатов
Ответ выдается в качественном формате. Для обоих супругов указывается генотип и фенотип.
Выдается заключение о наличие совпадений.
Считается, что наличие трёх и более совпадений может увеличивать риск иммунного невынашивания беременности. Состояние требует консультации иммунолога.
Отсутствие совпадений говорит о протекании беременности без изменений.

Трудности с зачатием не всегда могут быть связаны с проблемами со здоровьем или возрастом одного или обоих супругов. Иногда причиной может стать несовместимость партнеров на иммунном уровне. Когда пара обращается в специализированную клинику после одного или нескольких лет неудачных попыток завести ребенка, одним из обследований, которые будут ей назначены, станет HLA-типирование.

HLA-типирование (human leucocyte antigens) – это исследование антигенов обоих партнеров на совместимость. Исследуемые антигены располагаются на поверхности лейкоцитов.

Наш иммунитет изо-всех сил старается защищать нас от негативного воздействия окружающей среды: бактерий, инфекций, вирусов и т.д. Но, как и в каждом механизме, в иммунной системе возможны сбои. После оплодотворения яйцеклетки образовавшийся может быть воспринят иммунной системой женщины как чужеродная или собственная патогенная клетка. В этой ситуации эмбрион не сможет закрепиться в матке и продолжать развитие. Такое отклонение может стать причиной неудачных протоколов и невынашивания на ранних сроках. HLA-типирование помогает определить уровень иммунной совместимости супругов и возможность на появление в их паре здорового потомства.

Для проведения HLA-типирования супруги должны сдать кровь из вены. Никакой особенной предварительной подготовки это обследование не требует. Из венозной крови выделяются лейкоциты. На их поверхности располагаются молекулы белка – антигены главного комплекса гистосовместимости. Они также называются HLA-антигены. Набор антигенов каждого человека уникален. Они отвечают за распознавание чужеродных клеток в организме человека и своевременную реакцию иммунной системы. Каждый антиген кодируется HLA-геном в шестой хромосоме ДНК человека. Внутри этой хромосомы ген располагается в 7 областях (локусах) – HLA-А, HLA-В, HLA-С и HLA-D, который в свою очередь состоит из HLA-D, HLA-DP, HLA-DQ и HLA-DR. Особенности расположения генов в локусах позволяют формироваться множеству комбинаций (), которые делают антигены каждого человека уникальными.

Так что же происходит с HLA-антигенами при беременности и почему организм матери может отвергать плод?

Во время формирования эмбрион получает равное количество HLA-антигенов от матери и отца. В том случае, если HLA-антигены родителей не совпадают, эмбрион не более чем на 50% является родным для организма матери. Это означает, что иммунная система не воспримет его ни как патологически измененную собственную клетку, ни как полностью чужеродную и не уничтожит. Наоборот, начнут выделяться антитела, блокирующие отцовские HLA-антигены, находящиеся в семенной жидкости. Эндокринные железы начнут готовить организм женщины к беременности и всячески защищать эмбрион. Так он спокойно сможет добраться до матки и закрепиться в эндометрии.

Но бывают ситуации, когда HLA-сходство супругов выше нормы. В таких парах после оплодотворения яйцеклетки эмбрион формируется более чем на 50% схожий с клетками организма женщины, поэтому ее иммунитет расценивает его как патогенную клетку, которую нужно уничтожить во избежание дальнейшего заражения. При такой реакции организма у беременности крайне мало шансов на удачное завершение, она либо не наступает, либо прерывается на раннем сроке. Кроме этого HLA-сходство партнеров может привести к врожденным порокам развития у плода, крайне низкому иммунитету у ребенка при рождении или сильному токсикозу у женщины на позднем сроке беременности.

При HLA-типировании могут обследоваться антигены как I, так и II класса.

К I классу относятся антигены локусов HLA-А, HLA-В, HLA-С, которые располагаются на поверхности всех клеток. Антигены локусов HLA-DP, HLA-DQ и HLA-DR, входящих в локус HLA-D, относятся ко II классу. Они располагаются на активированных Т-лимфоцитах, В-лимфоцитах, моноцитах, макрофагах и дендритных клетках, то есть на клетках, от которых зависит иммунологический ответ. При выяснении причин невынашивания беременности, как правило, проводится HLA-типирование по II классу.

Результаты HLA-типирования мужчины и женщины представляют собой бланк, в котором содержится закодированное описание уникальных сочетаний их антигенов (аллелей). Правильно расшифровать их сможет только врач-иммунолог. Допускается не более двух совпадений. Но чем меньше совпадений в аллелях супругов, тем выше вероятность зачатия и успешного вынашивания ребенка. Если пара HLA-совместима, но зачатия не происходит, и беременность не наступает, значит, проблема в чем-то другом. В любом случае предпочтительнее полное отсутствие совпадений.

Если по результатам обследования были выявлены совпадения, которые иммунолог счел угрозой для зачатия и вынашивания беременности, доктор назначит паре соответствующее лечение. Как правило, его проходит женщина. Она подвергается либо активной, либо пассивной иммунизации.

1. Активная иммунизация заключается в многократном увеличении (в 10 000 раз) антигенной нагрузки на иммунитет женщины в результате введения концентрированной культуры лимфоцитов супруга. Процедура, как правило, проводится в 3 этапа, в результате чего иммунная система начинает отличать клетки мужа от собственных клеток, и угроза для эмбриона и плода в дальнейшем значительно снижается. Недостаток такой терапии – длительная подготовка и сохранение вероятности того, что будущему ребенку передадутся наследственные заболевания родителей.

2. Пассивная иммунизация проходит также в три этапа, но лечение проводится медикаментозное. Применяются такие иммуноглобулины, как Иммуновенин, Октагам, Интраглобин и другие препараты.

Пассивная иммунизация менее дорогостоящая по сравнению с активной. Но по результатам некоторых исследований активная иммунизация эффективна примерно на 60%.

Высокий уровень HLA-совместимости супругов, при котором терапия нецелесообразна, не исключает участие в донорских программах. Пара может подобрать подходящего или и осуществить .

Провести HLA-типирование пара может и до планирования беременности, чтобы заранее определить свою иммунную совместимость. Стоимость обследования в специализированных клиниках Москвы варьируется от 2 до 5 тысяч рублей за обоих супругов. Консультация с иммунологом в эту стоимость обычно не входит.